猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3'末端非翻译区中调控序列的研究

摘要

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3'UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3'UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV 3'UTR的启动子序列及二级结构,即复制过程中的最小调控元件.以空斑和Northem blot来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性,发现重组病毒感染动力学与亲本病毒无可见差别.结果表明PRRSV 3'UTR的5'端可耐受一定数目的核苷酸的缺失(41nt)与插入(23nt)突变,但进一步9nt缺失造成保守的环结构突变后就使病毒失去了感染性.证明了这是3'UTR中控制PRRSV复制过程的的必需序列及二级结构,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础.