牛布鲁氏菌A19突变株的构建及在BALB/c鼠中的免疫保护评估

摘要

[目的]构建牛布鲁氏菌A19-AVirB12突变株并免疫BALB/c鼠,初步评估了其免疫保护效果.[方法]应用PCR方法扩增A19疫苗株VirB12基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pBK-CMV-SacB-VirB12,将该质粒电击转化至布鲁氏菌A19感受态细胞中,筛选得到布鲁氏菌疫苗株A19的VirB12基因缺失株.以A19疫苗株为参照,应用A19-△VirB12疫苗接种BALB/c小鼠,免疫45d后布鲁氏菌2308强毒株攻毒,攻毒15d后取BALB/c鼠的脾脏进行克脾指数测定和病理组织学检测.Western-blotting鉴定VirB12蛋白的免疫反应性.[结果]构建了牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株,小鼠免疫攻毒后15d,A19-△VirB12免疫组和A19免疫组的克脾指数与对照组之间有显著性差异(P＜0.05).A19免疫组与A19-△VirB12免疫组之间克脾指数差异不显著(P＞0.05).Western blotting实验表明VirB12蛋白具有免疫反应性.[结论]牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株与亲本株A19免疫保护性无明显差异,通过血清学方法可区分疫苗免疫与野生型牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)感染动物,具备作为标记疫苗的潜力.