牛种布鲁氏菌ClpS基因突变株的构建及其对毒力的影响

摘要

试验旨在探究ClpS基因在布鲁氏菌中的作用,分析比较ClpS基因突变对布鲁氏菌毒力的影响.利用同源重组技术,构建布鲁氏菌ClpS基因突变株,通过检测细菌生长曲线、细菌LPS合成能力及其在巨噬细胞内的存活能力和小鼠模型中的毒力,比较亲本株2308和突变株△ClpS两者之间的差异.结果 显示,在相同的培养条件下,亲本株2308和突变株△ClpS的细菌浓度无明显差异,且两者提取的LPS银染结果基本一致,表明ClpS基因突变不影响布鲁氏菌生长速度,不影响细菌LPS合成;在细胞感染模型中,突变株△ClpS在感染后72 h的胞内存活能力极显著低于亲本株2308(P＜0.01);小鼠感染试验显示,在感染后1周,亲本株2308感染组和突变株△ClpS感染组小鼠脾脏重量及细菌含量无显著差异,但在感染后4周,突变株△ClpS感染组的小鼠脾脏细菌含量为103.93 CFU/g脾脏,显著低于亲本株2308(106.68 CFU/g脾脏,P＜0.01),且突变株△ClpS感染组的小鼠脾脏肿胀程度极显著低于亲本株2308(P＜0.01).综上所述,布鲁氏菌ClpS基因突变不影响细菌生长速度及细菌LPS合成能力,但ClpS基因突变可降低布鲁氏菌在小鼠脾脏内的定殖能力.