Pfk基因过表达对乳酸乳球菌N8产nisin速率的影响

摘要

[目的]通过基因工程手段增加糖酵解途径中编码限速酶6-磷酸果糖激酶基因Pfk在乳酸链球菌素(nisin)产生菌Lactococcus lactis N8中的表达,增快nisin的产生,从而提高单位时间内nisin的产量,缩短发酵周期.[方法]将Pfk基因及编码以cAMP为依赖的蛋白激酶催化亚基基因pkaC克隆到表达质粒pMG36e上,将共表达重组质粒转入L.lactis N8中,使Pfk-pkaC基因过量表达,得到重组菌株L.lactis N8-pMG36e-pfk-pkaC,并比较该重组菌株与野生菌的生长曲线、胞内6-磷酸果糖激酶活性、发酵上清液的抑菌活性及效价,并从转录水平分析两株菌nisA及pfk-pkaC的转录差异,比较野生菌与重组菌在不同葡萄糖含量下培养产nisin的变化.[结果]Pfk基因与pkaC基因的过表达对重组菌的生长速度没有明显的影响,却能提高重组菌产nisin的速度,在发酵10h时nisin的产量比野生菌提高了20％,使得发酵周期缩短近2h.野生菌及重组菌在不同葡萄糖含量下培养发酵上清液的nisin效价没有明显的变化.[结论]糖酵解途径中6-磷酸果糖激酶基因Pfk的过表达可以加快乳酸乳球菌N8产nisin的速率,缩短发酵周期.