空肠弯曲菌cjaA基因在乳酸乳球菌中分泌性表达及口服免疫研究

摘要

为降低鸡肠道中空肠弯曲菌的定植水平,本试验将空肠弯曲菌的膜转运蛋白cjaA基因、usp45基因分泌信号肽以及大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)编码基因通过串联的方式插入食品级乳酸乳球菌表达载体,构建分泌性表达系统,将重组分泌性乳酸乳球菌口服免疫鸡,从而达到降低空肠弯曲菌在鸡肠道中定植的目的.首先利用PCR扩增乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白Usp45基因分泌信号肽的编码序列SPusp45,克隆到食品级载体pNZ8149中,以空肠弯曲菌主要免疫保护性抗原CjaA蛋白的基因片段为靶基因,并插入大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因(LTB),构建表达空肠弯曲菌cjaA基因和融合表达cjaA-ltb的重组分泌性乳酸乳球菌表达系统,通过Western blot鉴定重组菌株蛋白表达情况,进而将重组乳酸乳球菌经口服免疫试验鸡,免疫后分别测定乳酸乳球菌自鸡体内的排出情况、以及CjaA表达蛋白诱导鸡体产生血清抗体和肠道粘膜抗体的水平,最后将空肠弯曲菌口服攻毒免疫鸡,通过测定鸡泄殖腔棉拭子中空肠弯曲菌的数目来判定口服免疫效果.结果显示,Western blot检测cjaA全基因及LTB基因片段均可在重组乳酸乳球菌胞内可溶性表达,并可分泌至胞外.口服乳酸乳球菌在鸡体内可维持7d以上;鸡口服免疫后可产生CjaA蛋白特异性的血清IgG和肠粘膜sIgA抗体;口服乳酸菌可促进鸡机体的生长;重组乳酸乳球菌口服免疫后空肠弯曲菌在鸡体内的增殖速度显著低于对照组.上述结果显示,本试验成功构建了重组CjaA及LTB蛋白的食品级分泌性乳酸乳球菌诱导表达系统;表达CjaA及LTB蛋白的重组分泌性乳酸菌口服免疫鸡对空肠弯曲菌在鸡肠道的定殖具有一定的抑制作用,为研制重组乳酸菌口服家禽免疫制剂防治空肠弯曲菌奠定了基础.