一种重组腺病毒载体产生及操作的新方法

摘要

目的建立一种快速、高效的产生腺病毒的实验方法.方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)装在穿梭质粒,线性化后与腺病毒骨架载体一起电穿孔转染大肠杆菌,使之同源重组,产生病毒基因组质粒.后Pac酶切,脂质体介导转人293细胞以包装出病毒.扩增后收获病毒,氯化铯密度梯度离心纯化,空斑试验测滴度.结果 52个大肠杆菌克隆,其中有1个发生同源重组,产生腺病毒基因组质粒pAdEGFP,转染293细胞,荧光显微镜下产生绿色荧光.病毒纯化后达1011pfu/m1.结论大肠杆菌内质粒间同源重组的方法可以高效、简便、快捷地产生重组腺病毒载体,是一种很好的制备重组腺病毒载体的方法.