CXCR4基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的 探讨构建大鼠趋化因子受体4(CXCR4)基因过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的 基因的水平.方法 设计CXCR4基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增CXCR4 基因片段;用Age Ⅰ酶切GV208载体;通过连接酶将CXCR4 基因片段连接至线性化的GV208载体上;运用PCR方法鉴定阳性克隆的CXCR4-GV208载体;按GV208慢病毒包装试剂盒说明书包装慢病毒并运用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法行滴度检测;然后用重组慢病毒转染293T细胞(人胚肾细胞),观察GFP表达.结果 通过PCR成功地扩增了CXCR4基因片段并连接到了GV208病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定,证明CXCR4-GV208质粒构建正确,重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达.包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108 TU/mL.结论成功构建CXCR4-GV208慢病毒载体,为CXCR4基因的后期研究提供了实验基础.