两种泥鳅芳香化酶基因的克隆与时空表达

摘要

鱼类的性别分化易受发育环境的影响.向性成熟的泥鳅和大鳞副泥鳅个体注射绒毛膜促性腺激素,获得卵子和精子进行人工授精.把胚胎分别置于20℃、25℃和30℃条件下,使其发育.经性腺检查发现随着温度的升高两种泥鳅中雄性个体所占的比例明显升高,获得明显的偏雄比率群体.根据已知细胞色素P450芳香化酶CYP19b基因序列设计嵌套简并引物用巢式PCR扩增并克隆出了两种泥鳅的CYP19b的DNA片段.MaCYP19b片段和PdCYP19b片段分别长1337bp和1473bp.在此基础上用各自的特异引物克隆出两种泥鳅CYP19b的相应cDNA片段.通过基因组DNA和cDNA序列的比较证明两种泥鳅的CYP19b基因均包含三个内含子和四个外显子,编码的蛋白质序列长145氨基酸残基.以GAPDH基因为对照,分别对两种泥鳅成体组织和不同发育阶段的胚胎的CYP19b进行了半定量RT-PCR表达分析,结果表明泥鳅CYP19b基因只在成体泥鳅卵巢、肾以及原肠胚和神经胚中表达.大鳞副泥鳅CYP19b基因在成体的脑、卵巢和肾以及神经胚和卵黄吸收期表达.这些结果为揭示细胞色素P450芳香化酶基因与环境性别决定机制的关系奠定了基础.