瓯江2种(鱼骨)的ISSR分析优化和自然种群遗传多样性的研究

摘要

以唇(鱼骨)和花(鱼骨)为材料,对影响PCR反应的主要因子-模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度进行优化,建立了适合屑鲭和花(鱼骨)基因组DNA的ISSR-PCR反应体系.25μL的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:约60n8模板DNA、1.2U Taq酶、0.4μmoL/L引物、2.0mmol/L MgCl2、0.2mmol/L dNTPs、2%甲酰胺.利用优化反应体系从60个ISSR引物中,筛选出18个稳定性高、重复性好的引物,对25个唇(鱼骨)个体和22个花鲭个体的DNA进行正式扩增,分别从两个种群分别扩增到168和156条扩增谱带,扩增片段长度在200-1500bp之间.根据扩增结果计算出两个种群的多态位点比例分别为67.52%和53.21%,Shannon多样性指数分别为0.3450和0.2749,Nei's指数分别为0.2292和0.1837,平均有效等位基因数分别为1.3875和1.3169.两个种群内样本间的平均遗传距离分别为0.2129和0.1529,结果表明两个种群的遗传多态性较高,其中唇(鱼骨)的多样性明显高于花(鱼骨)群体.引物UBC845扩增的610bp带和UBC854扩增的1240bp带为唇(鱼骨)种的特异性谱带.(鱼骨)属鱼类基因组中均含有微卫星DNA序列:(AG)8、(GA)8、(CT)8和(GAA)6.本研究为唇(鱼骨)和花(鱼骨)的种质保护、合理开发利用以及选择育种提供了一些基础数据.