胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株的毒性作用

摘要

采用MTT检测法、Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测法及细胞形态学观察法,研究了植物型杀虫剂胡椒碱对白纹伊蚊Aedes albopictus C6/36细胞株的细胞毒性、诱导细胞凋亡与坏死的关系、Fas蛋白的表达、细胞生长状态改变及受损细胞的恢复.结果表明: 胡椒碱浓度在0.035 mmol/L以上时可以诱发C6/36细胞形态学改变,在倒置显微镜下表现为细胞呈多形性,细胞胀大或皱缩,细胞间隙增宽,大片细胞聚集成团,脱落、崩解、死亡.用胡椒碱处理24 h后,对C6/36细胞的半数毒性浓度(IC50)为 0.32 mmol/L,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强.Annexin-V/PI双染法检测结果显示药物浓度在0.28 mmol/L 以上诱导的细胞凋亡明显,药物浓度为0.56 mmol/L 时细胞凋亡率达19.4%,而药物引起的细胞总死亡率为72.7%; Fas蛋白表达在药物浓度0.28 mmol/L 以上时有所上调,但不明显.高浓度胡椒碱(0.56 mmol/L)分别作用于C6/36细胞24和48 h,在经历一段生长停滞后,24 h组受损细胞均可缓慢恢复,而48 h组细胞则出现不可逆性的损伤.由此认为: 胡椒碱对C6/36细胞株有毒性作用,但药物诱导的细胞凋亡在细胞毒性作用机制中不占主导地位; 胡椒碱对C6/36细胞的作用有时间依赖性,延长作用时间,药物对细胞的毒性作用增强.