棉铃虫Wnt-1基因克隆、多克隆抗体制备及在滞育和非滞育蛹脑中的表达检测

摘要

[目的]Wnt1蛋白是Wnt/β-catenin信号通路的重要成员.本研究旨在克隆棉铃虫Helicoverpa armigera Wnt1基因,制备多克隆抗体,进而从蛋白水平初步研究该蛋白在滞育和非滞育蛹脑中的表达情况.[方法]通过RACE的方法克隆棉铃虫Wnt1基因.根据获取的序列构建Wnt1的真核表达载体并调查其亚细胞定位,同时构建原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达、纯化后免疫兔子,制备多克隆抗体.最后用Western blot的方法检测Wnt1蛋白在两种发育状态蛹脑中的表达情况.[结果]成功克隆了棉铃虫Wnt1基因(GenBank登录号为KJ206240).Wnt1定位在细胞质,通过镍柱纯化获得了较纯的重组蛋白.制备的Wnt1抗体效价高达1∶625 000.Western blot结果表明滞育蛹脑中Wntl蛋白水平明显低于非滞育蛹脑.[结论]获得了高效价的棉铃虫Wnt1多克隆抗体.我们的结果表明滞育蛹脑中Wnt/β-catenin通路很有可能受到抑制.本研究结果为进一步深入研究棉铃虫Wnt/β-catenin信号通路在棉铃虫发育中的作用奠定了基础.