草菇菌丝体凝集素凝血活性及其氨基酸残基化学修饰

摘要

通过磷酸缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素离子交换层析等步骤,从草菇(Volvariella volvacea)菌丝体中分离得到凝集素,进而对蛇、鸭、小鼠、鸡、驴、鸽子、仓鼠7种动物的血红细胞进行凝血实验,并分别用N-溴代丁二酰亚胺(N-bromosuccinimide,NBS)、焦炭酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate,DEPC)、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)对草菇菌丝体凝集素中的色氨酸残基、组氨酸残基、丝氨酸残基进行化学修饰,检测其凝血活性.结果 表明:草菇菌丝体凝集素对蛇、鸭、小鼠、驴、鸽子、仓鼠血红细胞的凝血效价分别为25、24、27、27、24、26,对鸡血红细胞无凝血活性.色氨酸残基被修饰后凝集素凝血活性丧失,组氨酸残基、丝氨酸残基被修饰后对凝集素凝血活性无影响,表明色氨酸残基处于草菇菌丝体凝集素凝血活性中心,是维持草菇菌丝体凝集素凝血活性的必需氨基酸,而组氨酸残基、丝氨酸残基并非维持凝集素凝血活性必需的氨基酸.