甜荞胰蛋白酶抑制剂cDNA片段的克隆及序列特征

摘要

采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂(buckwheat trypsin inhibitor,BTI),经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-RACE等方法,直接体外扩增该抑制剂基因,首次获得总长为361 bp的DNA片段(GenBank登录号为AY335158),并命名为BTI-W1.该片段包括一个183 bp的开放阅读框,编码61个氨基酸.由该基因推导的氨基酸序列与已报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI-2的氨基酸序列的同源性达100%.BTI-W1基因的获得,对于深入开展荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能关系的研究具有重要意义,也为荞麦植物资源的开发利用建立了前期研究基础.