白色念珠菌形态发生相关基因的克隆与鉴定

摘要

抽提白色念珠菌菌丝状态下的mRNA, 制备cDNA文库. 以白色念珠菌菌体和菌丝mRNA为模板合成探针, 进行差别杂交筛选(differential hybridization screening). 得到一个在菌体形态下表达较强的克隆和67个菌丝形态下表达较强的克隆. 物理图谱分析和核苷酸序列分析表明菌体形态下表达的CX1 cDNA片段编码细胞色素P450 L1A1(羊毛甾醇14a-脱甲基酶, lanosterol 14α-demethylase), Northern杂交分析证明该基因的表达是菌体形态专一的, 血清对其表达有抑制作用. 我们还分析了一个菌丝形态专一的CX2 cDNA片段, 经核苷酸序列测定, 发现该cDNA编码产物包含一个串联重复序列, 与白色念珠菌ALS1的重复序列高度同源. Northern杂交分析表明, 在菌丝形态下生长的白色念珠菌中其表达量很高, 而在菌体形态下生长的白色念珠菌中则不表达. 利用这两个cDNA片段作为探针, 我们从染色体文库中克隆了对应的全长基因, 并对这些基因片段在染色体上的定位进行了分析.