真鲷肿瘤坏死因子α(TNFα)cDNA的克隆与表达

摘要

采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)的方法,从真鲷中克隆到1264 bp的TNFα全cDNA编码序列(GenBank登录号为AY314010).该序列包括666 bp可读框(0RF),85 bp的5′末端非编码区(UTR)以及514 bp的3′末端非编码区.序列的3′UTR含5个mRNA不稳定模体(motif)和3个内毒素应答序列,但是未发现基因的Poly A加尾信号.由该序列推导的多肽含有明确的跨膜域,TNF家族的标签序列(signature),TNF2家族分布(profile)文件,粘多糖结合位点和细胞粘附位点.进化分析显示,真鲷TNF与哺乳类TNFα和TNFB具有较高的相似性,源于共同的祖先.但结构及表达分析表明,它是TNFα而不是TNFB.表达研究显示,真鲷TNFα存在组成型和诱导型两种表达形式,表现在刺激与非刺激的真鲷中,TNFα均可在部分组织中表达,但是在受刺激鱼体中基因表达的组织分布显著增多.