人肿瘤坏死因子样蛋白全长cDNA的克隆及原核表达

摘要

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究.方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA.应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及其存在的结构域和基序.以Northem印迹分析检测TNFLP的mRNA的组织分布,并用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)原核表达系统分段表达TNFLP的N端和C端蛋白.结果TNFLP全长共2112 bp,编码一208个氨基酸的蛋白.亲、疏水性分析显示,TNFLP有两个疏水区,且C端95个氨基酸与小鼠的TNF-α一致性为42%.基序分析显示,TNFLP的C端有一内质网膜定位信号-TYKRL,与TNF-α完全一致.人的TNFLP位于人的16号染色体上.Northern杂交显示,TNFLP在心、脑和胰腺中呈高表达,可见一个转录本.用GST原核表达系统,分段表达了TNFLP的N端和C端.结论初步分析了TNFLP的组织表达谱,并分段表达了其N端和C端,为进一步研究其功能提供了条件.