香鱼(Plecoglossus altivelis)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的分子克隆、鉴定及免疫相关性表达

摘要

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是TNF超家族成员之一,在动物机体抵抗细菌和病毒入侵时发挥重要作用.本研究基于香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞转录组数据库,获得了香鱼TNF-α基因(PaTNF-α)全长cDNA序列.PaTNF-α由1932个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码235个氨基酸,预测分子量为26.4 kDa.氨基酸序列多重比对分析表明,PaTNF-α具有TNF超家族的特征序列、1个TACE酶切位点和1个保守的二硫键,与虹鳟(Oncorhynchus mykiss)TNF-α同源性最高,为53.4％;系统进化树分析表明,鱼类TNF-α形成一个大簇,PaTNF-α与虹鳟TNF-α进化相关性最高.实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)结果显示,PaTNF-α mRNA在头肾中表达量最高;鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后香鱼肝、脾、头肾和外周血细胞中PaTNF-α mRNA表达量显著上调;香鱼单核/巨噬细胞经鳗弧菌、LPS和poly(I∶ C)处理后,PaTNF-α mRNA表达量显著上调.原核表达了PaTNF-α成熟肽,并制备了抗血清.Westernblot分析表明,鳗弧菌感染后香鱼血清和单核/巨噬细胞上清中的PaTNF-α表达量含量也显著增加.综上,香鱼TNF-α mRNA及蛋白的表达与病原体感染密切相关,为深入研究鱼类TNF-α的生物学功能及其在病原体感染中的作用机制提供理论基础.