真鲷肿瘤坏死因子α(TNFα)基因的克隆与表达的研究

摘要

采用同源克隆的方法，根据近邻物种TNFα基因序列设计兼并引物，在真鲷中克隆得到了256bD的帆基因的同源片断。采用末端快速克隆RACE的方法，获得了该基因的全基因编码序列。该基因全长1264bp，包括666bp开放式读码框ORF，编码222个氨基酸的前体蛋白；和85bp的5’末端非编码区UTR以及514bp的3’末端编码区。该基因序列的3’末端编码区包含5个mRNA不稳定模体insta-blilty motif和3个内毒素应答模体endotoxin-response-motifs，但是该序列未发现基因的终止信号。由该基因推导的氨基酸序列没有糖基化位点和信号肽区域，但是有一明显的跨膜区域，属膜结合蛋白；该基因的氨基酸序列含有一明确的TNF家族签名序列模式和粘多糖结合位点及细胞黏附位点，与该基因的功能密切相关。由该基因全序列构建的进化树表明，该基因与哺乳类TNFα和TNFβ都具有较高的同源性，分别属于不同的进化分支，但是经该基因序列的一级结构和二级结构以及基因表达研究分析，表明该基因是胍而不是删。表达研究表明，真鲷TNFα存在结构型和诱导型表达两种形式，表现为刺激与非刺激的真鲷中，TNFα基因均可在部分组织中表达；但是在受刺激鱼体上，基因表达的组织分布显著增多。