农杆菌介导的RNAi CP基因在大豆中的转化

摘要

花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是大豆主要病害之一,生产上常采用种植抗性品种方法来防治.本研究以RNA干扰花叶病毒衣壳蛋白(coat protein,CP)基因为表达载体,Bar基因作为筛选标记基因,成熟子叶节为外植体,采用农杆菌介导法获得了22株T0代转基因大豆生根苗,经草丁膦涂抹、Bar试纸条和PCR法鉴定,获得RNAiCP转基因植株18株；对转基因植株T1代的遗传分析表明,外源基因能够稳定遗传到下一代且符合孟德尔遗传规律；T1代Southern杂交表明,导入的干扰片段为单拷贝；花叶病毒摩擦接种表明,RNAi CP转基因大豆植株具有抗花叶病毒特性；摩擦接种后3周,DAS-ELISA检测进一步表明,RNAi CP转基因植株花叶病毒检出率仅为7.69％,而非转基因植株为100％.这表明RNAi花叶病毒CP基因可用于抗大豆花叶病毒的研究.