大豆花叶病毒

摘要： 【目的】由大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)引起的大豆花叶病是世界性大豆病害之一,利用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术研究GmSZFP在大豆与SMV互作过程中发挥的功能,为深入探讨其分子机制奠定基础。【方法】以大豆品种冀豆7号与SMV毒株SC-8、N3组成的亲和、不亲和组合为试验材料,运用生物信息学预测GmSZFP的分子结构特征;以酵母转录激活试验检测其转录因子活性;借助实时定量PCR(RT-qPCR)验证GmSZFP在大豆与SMV互作中转录水平的表达特征;结合VIGS技术探究GmSZFP在大豆与SMV互作过程中的功能。【结果】通过PCR克隆GmSZFP的CDS区,序列全长为1071 bp;氨基酸序列分析和酵母转录激活试验发现GmSZFP为C2H2型锌指蛋白转录因子,且具有转录激活活性;RT-qPCR结果显示,GmSZFP受SMV的强烈诱导,在亲和组合与不亲和组合中的表达模式不同,在不亲和组合中,GmSZFP呈先上升后下降的表达趋势,其表达水平明显高于亲和组合,若在接种病毒前给叶片预注射咪唑,GmSZFP的表达水平降低,并与亲和组合相近,说明GmSZFP在转录水平响应SMV的侵染并受胞内H2O2信号调控;利用VIGS技术沉默GmSZFP后,发现接种部位胼胝质的积累水平较对照大大降低,RT-qPCR检测胼胝质合酶基因GmGSL7c和GmGSL12b的表达量较对照降低,胼胝质水解酶基因BG的表达量较对照增加;在基因沉默植株叶片上点接种SMV后72 h,病毒向外扩散至2 mm,在96 h时病毒扩散至3 mm,而对照组叶片在接种点外始终未能检测到SMV外壳蛋白CP的表达;摩擦接种SMV后10 d,在基因沉默植株的上位叶表现出花叶、失绿和卷曲等感病症状,并检测到CP的表达,说明沉默GmSZFP后,SMV在胞间扩散和长距离运输的能力均增强。【结论】大豆GmSZFP是典型的C2H2型单锌指蛋白,GmSZFP在大豆抵抗SMV侵染过程中发挥正调控作用。

摘要： 为了阐明大豆Glycine max(L.)Merr.胼脈质合酶在大豆抵御大豆花叶病毒(Soybean mosaic oirus,SMV)侵染过程中的关键作用,采用生物信息学方法在大豆中鉴定出24个胼胝质合酶,并挑选出受一氧化氮(NO)影响且参与SMV抗性调控的大豆胼胝质合酶Glyma.08G308200(GmGSL7c).使用RT-qPCR验证了清除NO的大豆植株中基因GmGSL7c的表达情况,并借助基于烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默(VIGS)技术沉默GmGSL7c基因.结果发现,GmGSL7c的沉默影响了叶片中SMV诱导的胼胝质积累,在沉默植株未被接种的上位叶中可检测到SMV外壳蛋白基因SMV-CP并观察到发病症状,表明GmGSL7c基因的沉默抑制了大豆对SMV的抗性,为进一步研究大豆与SMV间互作的抗病信号通路奠定了基础.

摘要： 近日,农学院智海剑教授团队在国际植物领域著名杂志《Molecular Plant》上在线发表了研究论文。该论文阐述了如何从大豆品种大白麻中图位克隆了一个编码NLR蛋白的抗大豆花叶病毒(SMV)基因(Rsc4-3)。与以往发现的细胞内行使抗病功能的NLR蛋白不同,该抗病NLR蛋白Rsc4-3在植物细胞壁上与大豆花叶病毒无毒因子CI特异识别并介导对SMV的抗性。

摘要： 【目的】探究侵染掌叶半夏(Pinellia pedatisecta)的大豆花叶病毒(Soybean mosaicvirus,SMV)衍生的干扰小RNA(virus-derivedsmallinterferingRNA,vsiRNA)序列特征,为掌叶半夏抵御病毒的作用机制研究提供参考。【方法】以一株来自广西的具有典型病毒病症状的掌叶半夏为材料,取其褪绿斑驳的叶片采用TRIzol法提取总RNA,并进行小RNA深度测序(Small RNADeepSequencing);利用快速扩增cDNA末端(Rapid AmplificationofcDNAEnds,RACE)和分段克隆技术获得病毒的全长基因组序列,利用MEGA 7.0将其与有代表性的病毒序列构建系统发育进化树并分析亲缘关系;以克隆测序获得的基因组序列作为参考进行vsiRNA特征分析。【结果】小RNA深度测序共获得4851249条高质量的读段(reads),长度为21、22和24 nt的reads具有较高的丰度,占比分别为33.4%、13.7%和11.3%。该病毒分离物的基因组全长为9735 nt,编码3105个氨基酸,其基因组全序列与SMV HZ1分离物核苷酸序列相似性为86.93%,暂命名为SMV NN;系统发育进化树显示,SMV NN与分离自半夏的SMV HZ1分离物的亲缘关系最近。将vsiRNA定位到克隆测序后获得的SMV NN的基因组上,分析该病毒的vsiRNA特征,结果发现长度为21和22 nt的vsiRNA具有较高的丰度,病毒全基因组的正链和负链均能被vsiRNA覆盖,且分别在HC-Pro和P3蛋白编码区具有最强热点。【结论】掌叶半夏主要通过dicer样核糖核酸酶4(dicer-likeribonuclease 4,DCL4)和Argonaute蛋白1(Argonaute1,AGO1)对SMV的HC-Pro和P3蛋白编码区进行剪切,主要产生长度为21和22 nt的vsiRNA,从而抑制SMV在植株体内的复制。

摘要： 为了筛选出对大豆花叶病毒(SMV)病具有抗性的大豆新品系,以1108份新选育的大豆品系为材料,人工接种SMV优势株系SC3和SC7,通过调查发病率和病情指数以考察其抗性,同时分析其亲本来源和抗性。结果显示,有356和326份大豆品系对SMV株系SC3和SC7分别表现高抗,占比为32.13%,29.42%,同时对这2个株系均表现高抗的品系有252份,占22.75%。相关性分析结果显示,SC3和SC7发病率与病情指数呈极显著正相关(r=0.942和r=0.956)。线性回归结果显示,SC3和SC7发病率与其病情指数呈线性关系,线性关系显著,其发病率可以分别解释其病情指数变异的88.75%,91.47%。从亲本来源可以看到,母本来源于河北育成的品系数最多,有97份;父本来源于国外育成的品系数最多,为85份。抗性分析显示,来源于河北的母本抗性的病情指数相对较低,其后代品系平均发病率和病指指数也均相对较低。研究结果为SMV病情预测和大豆抗病育种提供了参考。

摘要： 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)作为半夏(Pinellia ternata (Thunb.) Breit.)主要病毒病害之一,已对其产量和品质造成严重影响.构建病毒侵染性克隆是反向遗传学研究病毒基因功能、病毒与宿主相互作用的有力工具,为明确SMV侵染半夏的分子机制,开展SMV全长cDNA侵染性克隆的构建特别重要.因此文中利用Gibson体外重组系统对大豆花叶病毒山西半夏分离物(SMV-SXBX)侵染性克隆进行组装,通过农杆菌浸润法接种健康半夏;进一步通过机械传代、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)证实SMV-SXBX侵染性克隆3'末端含有poly(A)尾56 nt时具有稳定侵染性.该方法便捷、高效,且避免了SMV侵染性克隆在大肠杆菌中的不稳定问题.SMV全长侵染性cDNA克隆的构建,为进一步研究SMV复制和发病的分子机制奠定了基础.

摘要： 大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病严重影响我国大豆产量及品质.本研究利用抗病高产稳产大豆品种皖豆33配制抗×感和抗×抗杂交组合,接种SMV优势株系SC3,研究皖豆33的抗性遗传方式及其与不同品种抗性基因间的等位性关系.结果表明:接种SC3后,抗感组合(Williams 82×皖豆33)及(皖豆33×南农1138-2)的F1单株均表现抗病,卡方测验结果显示F2群体符合3抗:1感的分离比,F2:3家系分离比符合1抗:2分离:1感,表明皖豆33对SC3的抗性由1对显性基因(命名为RSC3(w))控制;抗×抗组合科丰1号、齐黄1号和大白麻×皖豆33的抗性基因等位性研究显示,科丰1号与皖豆33携带对株系SC3的抗性基因是等位的或紧密连锁的,齐黄1号、大白麻与皖豆33携带抗SC3的基因是不等位且独立遗传.利用皖豆33×南农1138-2的392株F2群体将皖豆33携带SC3的抗性基因RSC3(w)定位在大豆2号染色体SSR标记BARCSOYSSR_02_0610和ZL-52之间,遗传距离分别为0.29 cM和0.35 cM,物理距离约为175 kb.

摘要： 为快速有效地检测大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV),本研究利用已制备的大豆花叶病毒衣壳蛋白(Coat Protein,CP)及其单克隆抗体,通过优化ELISA各个影响因子,建立大豆花叶病毒间接ELISA检测方法.结果显示最佳检测条件为:检测材料抗原包被酶标板37°C1 h,检测抗体工作浓度125 ng/mL,孵育60 min,酶标抗体工作浓度100 ng/mL,孵育30 min:SMV CP蛋白最低检测限为3.23 ng/mL;该方法重复性变异系数小于3％,重复性良好;运用上述检测条件与RT-PCR检测方法对田间样品进行随机检测,结果显示一致率高达94％.SMV间接ELISA检测方法的成功建立,为SMV快速检测试剂盒及试纸条的研发奠定了基础.

摘要： 因此，本研究在前人的基础上，采用同一套鉴别寄主，通过对中国黄淮南部四省市田间大豆花叶病毒SMV病样的大量采集、分离纯化、血清学鉴定、株系鉴别，目的在于明确黄淮南部SMV株系的组成和分布;并针对黄淮地区种植面积最大的安徽省的SMV株系变化情况进行了跟踪调查。

摘要： 本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(cp)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了cp蛋白,通过亲和层析获得了纯化的cp蛋白;制备了9株cp蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够阻断病毒的感染.本研究制备的单克隆抗体为大豆花叶病毒检测试剂盒的研制和大豆花叶病毒抗病育种研究打下基础.

摘要： 构建大豆花叶病毒半夏株系编码蛋白的诱饵载体质粒和猎物载体质粒,转化酵母菌株AH109,在酵母总蛋白中western blot检测发现各基因均能在酵母中正确表达。用酵母双杂交体系研究了6K1蛋白和SMVP编码蛋白之间的互作,发现6K1和CI、NIa-VPg、NIa-pro、NIb的杂交组合不但能在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal平板上正常生长并显蓝色,而且抽提酵母质粒用特异引物也都能PCR检测到组合中的目的片段.缺失掉SMVP-6K1C-末端的保守序列VXXQ,D6K1和NIa-pro还是能够互作。SMVP-6K1和CI、NIa-VPg、NIa-pro、NIb之间的互作说明6K1可能除了已知的膜结合功能外,还与其他病毒编码蛋白一起在病毒侵染过程中发挥作用。

摘要： 本文主要从血清学对与大豆花叶病毒相关的杭州半夏病鉴定及其病毒的分类的研究,并提出半夏分离P-1基因组不同区域表现出了变异趋势上的明显差异及猜测该病毒可能情况.

摘要： 鉴定了一个从杭州半夏上分离到的马铃薯Y病毒成员.该病毒自然侵染半夏,也能摩擦接种一些栽培大豆品种,而大豆花叶病毒(SMV)大豆分离物不能侵染半夏.Western-blot实验表明,半夏分离物与SMV和西瓜花叶病毒(WMV)血清学相关.测定了半夏P-1分离物的基因组全序列(9735nt).SMV大豆分离物HH5(9585nt)和杭州分离物HZ(9588nt)以及半夏P-2分离物的3'-末端序列(1733nt).推测的P-1分离物多聚蛋白与已报道的SMV氨基酸序列同源性为83％.在基因组的在大部分区域,两者同源性约90％左右,但P1蛋白区同源性很低,氨基酸序列同源性仅24.3％-29.0％,而与芋花叶病毒较相似,达62.2％.P-2分离物与P-1分离物相应区域核苷酸序列同源性为91％.两个大豆分离物的全序列与已测序的SMV分离物的核苷和编码蛋白氨基酸序列同源性分别为93-95％和97％.系统进化树分析和外壳蛋白序列比较表明,半夏分离物、WMV和SMV应当是同一病毒的不同株系.

摘要： 大豆花叶病毒（ＳＭＶ）基因组结构与其它马铃薯Ｙ病毒组成员一样，是单链正意ＲＮＡ，整个基因组按一个阅读框架翻译，产生多聚蛋白前体，通过蛋白酶切加工，形成不同功能的成熟蛋白：Ｐ〈，１〉、ＨＣ、Ｐ〈，３〉、ＣＩＰ、６Ｋ、Ｖｐｇ、ＮＩａ、ＣＰ。基因组翻译产物的加工由三种病毒蛋白酶参与，即：Ｐ〈，１〉（３５ｋｕ）、ＨＣ和ＮＩａ。该文对产生的各种功能蛋白进行了阐述。

摘要： 从田间采集到花叶、皱缩病株样本,经电镜观察和采用马铃薯Y病毒属病毒双夹心酶联检测试剂盒(DAS-ELISA)进行测定,样本检测出马铃薯Y病毒属病毒,利用马铃薯Y病毒属(Potyvirus)简并引物,以带病毒植株总RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到长约1 000bp的片段.将目的片段克隆至pMD-18T载体并进行了序列测定,测得全长为1 079bp的3'-末端基因组.BLAST分析表明与大豆花叶病毒同源性最高,达到83％.

摘要： 大豆花叶病毒病是世界大豆产区危害较重的主要病害,本实验中高抗SMV株系黑农39为母本,高感SMV株系品种合丰25为父本配置杂交组合,对FF代接种SMV进行田间抗性鉴定和抗病性遗传学分析,通过接种鉴定亲本FF并代的抗性表现,证明,对SMV1号株系的抗性是由一对显性基因决定的.利用RAPD技术在抗感池间寻找多态性标记,通过筛选引物,获得重复性最好的随机引物OPN11.并采用BSA法在黑农39和抗病池扩增出OPN片段,在合丰25和感病池扩增出OPN片段,在F同时扩增出OPN和OPN.用该引物分析黑农39*合丰25的F扩增个体,共显性的RAPD标记OPN与黑农39抗病基因的遗传距离为8.2cM.

摘要： 该文用５个大豆品种比较了开花期和结荚习性对大豆花叶病传播的影响。供试品种间，蚜虫的取食特性、获毒力和传毒率及病毒潜育期无明显差异。早花品种病情发展较缓，有限结荚品种病情发展停止早，晚花品种发病早，无限结荚品种发病期长。早花品种种传株率最低（２．７８℅），晚花品种种传株率最高（４０．１８℅），差异达极显著水平。在大豆花叶病流行区，选育和推广早开花和有限结荚的丰产品种可作为一项控病增产措施。

摘要： 提供对ToBRFV具有抗性的番茄植物。本发明的烟草花叶病毒组抗性番茄植物中，SlTOM1a基因、SlTOM1c基因和SlTOM1d已丧失功能。

摘要： 本发明公开了一种大豆花叶病毒(SMV)保守片段CFO及由其构建的反向重复载体(CFO‑TIR)在大豆对SMV广谱抗性中的应用。本发明首次对30条SMV基因组序列进行多序列比对和保守性计算，鉴定到一个保守性为92％的SMV片段CFO(核苷酸序列为SEQ ID NO:1)，构建CFO‑TIR载体并遗传转化进SMV易感大豆品种NN1138‑2中，该CFO‑TIR载体介导了转基因大豆对多种SMV株系的抗性，解决了转基因植株对SMV的广谱抗性问题。本发明所获转基因材料对培育SMV广谱抗性大豆具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种鉴定大豆对大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)流行株系SC3抗性鉴定的SSR标记CH0211及其检测方法和应用，通过利用新开发的与抗大豆花叶病毒SC3株系基因紧密连锁的SSR标记CH0211对大豆品种进行抗病性选择，以期获得抗SMV SC3株系的大豆新种质。本发明避免了大豆常规抗花叶病毒育种的周期长、工作量大、选择效率低、抗病表型选择易受环境影响等缺点，可大幅提高抗病育种选择效率，为对基因型的直接选择提供了可能，将极大地推动大豆抗病育种进程。

摘要： 本发明公开了一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒(ARISHR‑SMV)病害系统的方法及其应用，该方法包括以下步骤(1)利用发根农杆菌侵染大豆子叶诱导愈伤组织；(2)提纯大豆花叶病毒(SMV)；(3)大豆愈伤组织接种纯化的SMV粒子；(4)大豆发状根中SMV含量检测。本发明的方法成功应用到9个SMV株系，可快速、有效的鉴定SMV相关基因的功能，为分子标记辅助育种或转基因育种提供功能标记或基因，具有较大应用潜力，另外，本发明的方法还可以应用在大豆种质对SMV的抗性鉴定。

摘要： 本发明公开了大豆延伸因子家族在抗大豆花叶病毒中的应用。大豆延伸因子GmEF1a和GmEF1b可在通过内质网应激调控大豆抗大豆花叶病毒中应用。SMV复制发生在内质网上，需要GmEF1a和GmEF1b的参与，SMV的聚集引起内质网应激反应，沉默GmEF1a和GmEF1b会降低内质网应激反应，植株表现更抗病。可见沉默延伸因子家族GmEF1a基因和GmEF1b基因可用于构建抗SMV病毒的转基因植株。且由于这两个基因都源于大豆，因此，对转基因大豆的安全性有进一步提高。

摘要： 一种抗大豆花叶病毒基因GmST1、GmST1转基因大豆的培育方法与应用，属于大豆遗传育种技术领域。针对传统方法培育抗病品种存在的多倍体化，转化率低的问题，本发明提供了一种抗大豆花叶病毒转基因大豆的培育方法，包括如下步骤：将所述的抗大豆花叶病毒基因GmST1(核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示)构建到植物表达载体上，得到大豆GmST1基因重组载体；将上述重组载体导入农杆菌中，然后侵染大豆，培养后经鉴定获得转基因阳性植株。本发明可用于抗花叶病毒作物育种工作中。

摘要： 本发明公开了一种大豆花叶病毒(SMV)保守片段CFO及由其构建的反向重复载体(CFO‑TIR)在大豆对SMV广谱抗性中的应用。本发明首次对30条SMV基因组序列进行多序列比对和保守性计算，鉴定到一个保守性为92％的SMV片段CFO(核苷酸序列为SEQ ID NO:1)，构建CFO‑TIR载体并遗传转化进SMV易感大豆品种NN1138‑2中，该CFO‑TIR载体介导了转基因大豆对多种SMV株系的抗性，解决了转基因植株对SMV的广谱抗性问题。本发明所获转基因材料对培育SMV广谱抗性大豆具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种培育抗大豆花叶病毒的大豆的方法。本发明以SMV HC‑Pro基因作为靶标基因，对国内外SMV流行株系进行多重核苷酸序列比对，在保守区间内确定了gRNA靶点序列，构建了CRISPR/Cas9基因组定点编辑载体，进一步应用农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化体系，获得一批阳性转基因材料，通过SMV抗病鉴定、qRT‑PCR、DAS‑ELISA血清学实验，分别从表型水平、RNA水平和蛋白水平研究了T

摘要： 本发明公开了一种鉴定大豆对大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)流行株系SC3抗性鉴定的SSR标记CH0211及其检测方法和应用，通过利用新开发的与抗大豆花叶病毒SC3株系基因紧密连锁的SSR标记CH0211对大豆品种进行抗病性选择，以期获得抗SMV SC3株系的大豆新种质。本发明避免了大豆常规抗花叶病毒育种的周期长、工作量大、选择效率低、抗病表型选择易受环境影响等缺点，可大幅提高抗病育种选择效率，为对基因型的直接选择提供了可能，将极大地推动大豆抗病育种进程。

摘要： 本发明公开了一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒(ARISHR‑SMV)病害系统的方法及其应用，该方法包括以下步骤(1)利用发根农杆菌侵染大豆子叶诱导愈伤组织；(2)提纯大豆花叶病毒(SMV)；(3)大豆愈伤组织接种纯化的SMV粒子；(4)大豆发状根中SMV含量检测。本发明的方法成功应用到9个SMV株系，可快速、有效的鉴定SMV相关基因的功能，为分子标记辅助育种或转基因育种提供功能标记或基因，具有较大应用潜力，另外，本发明的方法还可以应用在大豆种质对SMV的抗性鉴定。