棉花根系总蛋白质提取及双向电泳方法的改良

摘要

对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良,以获得更好的分离效果,为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础.以鲁棉研28为材料,分别采用TCA/丙酮法、改良TCA/丙酮/SDS法、饱和酚-甲醇醋酸铵法这3种根系蛋白质提取方法,提取棉化幼苗根系总蛋白,并进行双向电泳进行蛋白质分离.在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对3种方法进行比较.利用饱和酚-甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白,其蛋白样品纯度高,SDS-PAGE电泳图谱清晰,蛋白点数量最多为601个点;TCA/丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为7.53 mg/g,但样品纯度低,SDS-PAGE电泳图谱模糊,蛋白点数量最少为417个点.采用考马斯亮蓝染色,上样量为1 500 μg获得的凝胶图谱效果较好.总之,适合棉花根系蛋白质提取的方法为饱和酚-甲醇醋酸铵法,在考马斯亮蓝染色蛋白质上样量为1 500 μg时能获得优良的分离效果.