鸭源PKC基因荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为建立基于鸭源宿主细胞的蛋白激酶PKC基因的实时荧光定量PCR检测方法.根据GenBank数据库的PKC基因设计、合成特异性引物,通过PCR技术扩增目的基因片段,构建重组质粒GV pXT19-T-PKC,并以其为阳性标准品建立荧光定量PCR检测方法和标准曲线,进行重复性、特异性和敏感性验证.结果显示,荧光定量PCR标准曲线为y=-3.334 0x+44.199,相关系数为0.995 4,扩增效率为99.19％;熔解曲线仅出现单特异峰,未检测到H5亚型/H7亚型/H9亚型禽流感病毒疫苗毒株、新城疫病毒和鸭肝炎病毒等参考毒株的核酸样本的荧光信号.说明,建立的荧光定量PCR方法具有良好的稳定性、特异性和灵敏性.