结肠癌细胞微泡中肿瘤相关性长链非编码RNA的检测及其功能研究

摘要

目的:验证结肠癌细胞释放的微泡中是否存在可检测的肿瘤相关性长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),并在结肠癌细胞微泡中筛选出新的肿瘤生长特性相关的微泡lncRNA,并对其功能进行初步研究,以期为未来结肠癌的治疗提供新的肿瘤标志物和治疗靶点。
　　方法:采用超速离心法分离结肠癌细胞株SW480,SW620培养基中的微泡,并在电镜下进行鉴定。然后以Trizol法提取其总RNA,通过real-time PCR检测目前研究已证实的常见肿瘤相关lncRNA在微泡中的表达。因SW480和SW620为建立于同一结肠癌患者原发灶和淋巴结转移灶,但性质不同的同源结肠癌细胞株,我们采用体外功能试验验证其与肿瘤干细胞相关性质相关的功能差异。继而,通过高通量mRNA-lncRNA芯片技术检测SW480及SW620微泡中的lncRNA谱,比较其中差异表达的lncRNA,通过生物信息学技术分析结肠癌细胞微泡中与肿瘤干细胞性质相关的mRNA和lncRNA。并预测其可能的功能及作用机制和相关通路。采用下调lncRNA表达的方法,通过体外功能学试验探讨目标lncRNA的功能。进而根据生物信息学预测的靶点或通路,进一步研究目标lncRNA的作用机制。
　　结果:具有相同遗传背景的结肠癌细胞系SW480和SW620,在与肿瘤干细胞相关的体外生长特性方面,包括干细胞标志物及干细胞相关基因表达,侵袭能力,自我更新能力等均存在差异。通过高通量芯片检测,通过生物信息学方法对两株细胞性质差异相关的微泡mRNA和lncRNA进行分析,大多差异表达的已知mRNA功能与肿瘤干细胞特性及肿瘤演进密切相关。通过对候选序列在基因组中的位置以及临近靶基因的分析,我们找出了一个功能可能与肿瘤干细胞相关的lncRNA。该lncRNA-KLF3-AS1位于KLF3基因转录本起始区反义链,其表达与KLF3正相关,可调控mRNA-KLF3的表达。通过体外功能试验,我们证明了KLF3-AS1对结肠癌细胞DLD-1与肿瘤干细胞相关的体外生长特性呈负调控作用。
　　结论:本研究可望为未来结肠癌的诊断治疗提供一种建立在微泡lncRNA水平,并针对肿瘤干细胞的新标志物和治疗靶点。值得未来进一步深入研究。

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前言

第一部分结肠癌细胞微泡对肿瘤干细胞相关体外生长特性的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四 、讨论

第二部分结肠癌细胞微泡中与肿瘤干细胞性质相关lncRNA的筛选

一、材料

二、方法

三、结果

四、 讨论

第三部分微泡lncRNA-KLF3-AS1在结肠癌中的表达及与肿瘤干细胞性质相关的体外功能研究

一、材料

二.方法：

三、结果

四、讨论

结论

参考文献

综述：

参考文献

致谢