乳链菌肽前体基因克隆及在乳酸乳球菌中的表达研究

摘要

乳酸乳球菌是一类长期应用于食品发酵业的有益微生物,以乳酸菌为受体的表达系统具有安全、表达产物便于分离,使用方便等优点.该实验提取乳酸乳球菌NIZO R5的基因组DNA为模板,用PCR方法得到乳链菌肽前体基因（nisA）,克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36e,构建了表达载体pMG36e/nisA.以Lactococcuslactis NZ9800为受体菌,研究了表达载体的表达情况.

目录

文献综述

前 言

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌种和质粒载体

1.1.2主要化学试剂

1.1.3主要溶液及其配制

1.1.4主要仪器设备

1.2方法

1.2.1细菌培养条件

1.2.2菌种保藏

1.2.3产Nisin细菌基因组DNA的制备

1.2.4琼脂糖凝胶电泳分析DNA

1.2.5引物设计和合成

1.2.6 PCR扩增

1.2.7质粒pMG36e的快速抽提

1.2.8连接反应

1.2.9大肠杆菌JM109感受态细胞的制备和转化

1.2.10阳性重组子的筛选与鉴定

1.2.11重组质粒转化乳酸乳球菌NZ9800及重组质粒的鉴定

1.2.12聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

2实验结果

2.1乳酸乳球菌NIZO R5基因组DNA的提取

2.2 PCR扩增获得目的基因

2.3 PCR扩增产物的克隆及筛选

2.4重组质粒的PCR分析

2.5重组质粒的双酶切分析

2.6克隆片段的DNA序列测定

2.7重组质粒转化受体菌及酶切分析

2.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

3讨论

3.1基因工程简介

3.2研究思路

3.3 PCR技术扩增乳链菌肽前体基因(nisA)

3.4基因克隆的策略

3.5克隆载体的选择

3.6 nisin前体基因的表达策略

4结论

参考文献

致谢