超高效液相色谱串联多级质谱法分离及鉴定油茶籽中的化学成分

摘要

油茶（Camellia Oleifera Abel.）是山茶属植物中一类可作为油料作物的常绿乔木。它的种子油茶籽经浸出或压榨得到的茶油中富含大量的不饱和脂肪酸，从而作为营养丰富的油料作物广泛栽培于我国的南方地区。油茶籽经提油后的副产物茶籽壳及茶籽粕含有丰富的茶皂素及茶黄酮等天然物质，却由于缺乏利用导致大量废弃。
　　本文通过回流法辅以液液分配净化法对油茶籽壳中的化学成分进行提取，并采用超高效液相色谱串联二级管阵列检测器与Orbitrap及多级电喷雾线性离子阱质谱(UPLC-DAD-LTQ-Orbitrap-MSn)的手段，对油茶籽中的化学成分进行初步鉴定，并且通过高分辨质谱的确证，多级质谱碎片的裂解信息、紫外光谱数据及与标准品的对比，获得了如下成果：⑴鉴定了油茶籽壳中60种化合物的结构，包括8种黄酮苷，7种多肽，36种皂素，6种原花青素及3种小分子物质。其中有35种皂素为新的化合物，1种黄酮苷、7种多肽及4种花青素为首次从本属植物中发现。⑵总结了茶皂素在负离子模式下的裂解规律，并开发了一种快速鉴定茶皂素的策略。依据其结构组成，茶皂素可分为苷元，有机酸（除部分去酰基化皂素）及糖链三部分，因此推断结构时可分为这三部分。首先，根据特征离子m/z451或m/z481是否存在，可以区分皂素是否带有有机酸基团，之后，有机酸基团及糖链组成均可通过中性丢失碎片判断。最后，对于去酰基化皂素而言，可以直接通过二级质谱上的[苷元-H]-离子判断苷元类型，而普通的皂素由于没有苷元离子，通过计算可推断苷元类型。⑶对比了各类化合物在HCD(高能诱导裂解;Higher energy Collisioninduced Dissociation)和CID(碰撞诱导解离; collisionally induceddissociation)碰撞下的质谱裂解行为，并对HCD碰撞用于化合物鉴定的作用进行了评估。结果显示HCD碰撞不适用于皂素类的解析，对黄酮苷类及多肽类化合物的解析能够起辅助作用，对原花青素类化合物提供的碎片信息优于CID碰撞。⑷对比了茶籽仁和茶籽壳化学成分的区别，结果显示，在鉴定出的60中化合物中，茶籽仁中含有的大部分化学成分均与茶籽壳相同，其中，黄酮及多肽的组成与茶籽壳完全一致，茶皂素种类比茶籽壳少四种，未检出原花青素和咖啡因。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 茶籽的研究概况

1．1．1 概述

1．1．2 茶籽中生物活性成分的研究进展

1．2 液质联用技术

1．2．1 液质联用接口技术的发展

1．2．2 超高效液相色谱技术的发展

1．2．3 高分辨质谱技术的发展

1．3 液质联用技术在天然产物分析中的应用

1．4 本论文的研究目的和研究内容

1．4．1 本论文的研究目的及意义

1．4．2 本课题的研究内容

第二章 实验方法

2．1 实验仪器与材料

2．1．1 仪器与设备

2．1．2 材料及试剂

2．2 实验方法

2．2．1 样品处理

2．2．2 液质联用方法

第三章 实验结果与讨论

3．1 提取方法的优化

3．2 色谱条件的优化

3．3 液液分配净化法对组分的影响

3．4 黄酮苷类化合物的质谱解析

3．4．1 黄酮苷类化合物的裂解模式

3．4．2 黄酮苷类化合物的鉴定

3．4．3 HCD碰撞模式下黄酮苷类化合物的裂解

3．5 多肽类化合物的质谱解析

3．5．1 多肽类化合物的鉴定

3．5．2 多肽类化合物在HCD碰撞模式下的裂解行为

3．6 皂素类化合物的质谱解析

3．6．1 皂素类化合物的裂解行为研究

3．6．2 茶皂素类化合物的鉴定策略

3．6．3 茶皂素在HCD碰撞模式下的裂解行为

3．7 原花青素类化合物的解析

3．8 其他化合物的解析

3．9 茶籽仁中的化合物及其与茶籽壳的对比

第四章 结论与展望

参考文献

致谢

研究成果及发表的学术论文

作者和导师介绍