嗜粘蛋白阿克曼菌对子宫内膜增生小鼠模型的影响作用及其机制研究

摘要

目的　　探索嗜粘蛋白阿克曼菌对子宫内膜增生小鼠模型的影响作用及可能机制，寻找子宫内膜增生的特定菌群治疗靶标。　　方法　　1.8周龄C57BL/6J小鼠分为五组：E2-AKK组(n=10)、E2-PBS组(n=12)、EC-FMT组(n=10)、H-FMT组(n=10)、NC组(n=10)。E2-AKK及E2-PBS两组进行卵巢切除+皮下埋植雌二醇缓释颗粒手术以建立子宫内膜增生模型，分别灌胃等量AKK、PBS8周。EC-FMT及H-FMT两组分别灌胃子宫内膜高分化腺癌患者粪便悬液、健康人粪便悬液。NC组常规饲养不予干预。　　2.qPCR测定小鼠粪便中AKK含量。　　3.ELISA法测定小鼠血清IL-6、E2浓度。　　4.免疫组织化学染色检测小鼠子宫ER、PR、PTEN、β-catenin、芳香化酶表达。　　结果　　1.去势C57BL/6J小鼠皮下埋植雌二醇缓释颗粒建立子宫内膜增生模型成功率100%。　　2.与NC组比较，E2-AKK组及E2-PBS组小鼠在试验过程中体重增加量最多(P﹤0.0001)；EC-FMT组较H-FMT组小鼠体重增加明显(P﹤0.05)。　　3.灌胃后AKK在小鼠肠道成功定植，与NC组及E2-PBS组比较，E2-AKK组定量显著升高(P﹤0.001)。　　4.ELISA实验结果表明，与NC组相比，E2-AKK、E2-PBS两组小鼠血清E2、IL-6水平显著升高(P﹤0.05)；EC-FMT组IL-6水平高于H-FMT组及NC组(P﹤0.05)。　　5.免疫组织化学染色结果表明，与NC组比较，E2-AKK组及E2-PBS组子宫组织中ER、β-catenin和芳香化酶表达均有增加(P﹤0.01)，PR、PTEN表达水平减少(P﹤0.01)；与E2-AKK组比较，E2-PBS组子宫组织中ER、β-catenin和芳香化酶表达量较多(P﹤0.05)，PR及PTEN表达水平减少(P﹤0.05)。EC-FMT组分别比较于H-FMT组及NC组，ER、芳香化酶表达增加(P﹤0.05)。　　结论　　1.雌二醇缓释颗粒埋植于去势C57BL/6J小鼠皮下可成功建立子宫内膜增生小鼠模型。　　2.AKK可能通过减少IL-6生成，导致芳香化酶合成减少，进而减少E2的合成，从而延缓小鼠子宫内膜增生的疾病进展。　　3.AKK及肠道菌群移植或许能作为子宫内膜增生的治疗新靶点。

目录

声明

前言

1.实验材料和方法

1.1主要实验试剂、材料与仪器设备

1.1.1主要实验试剂与材料

1.1.2主要实验仪器设备

1.2实验对象

1.3实验方法

1.3.1制作雌二醇皮下埋植缓释颗粒

1.3.2收集粪便制备悬液并冻存

1.3.3 AKK的制备

1.3.4动物饲养及分组

1.3.5提取小鼠肠道中微生物的总DNA

1.3.6荧光定量AKK

1.3.7 ELISA法测小鼠血清IL-6、E2浓度

1.3.8小鼠子宫内膜组织HE染色及免疫组织化学染色

2.统计学分析

3.结果

3.1预实验小鼠血清E2浓度变化

3.2实验过程中各组小鼠体重变化

3.3灌胃前后小鼠肠道AKK qPCR定量

3.4 ELISA法测小鼠血清E2、IL-6浓度

3.5小鼠子宫组织切片

4.讨论

4.1小鼠皮下埋植蜂蜡雌二醇缓释颗粒可建立子宫内膜增生模型

4.2 AKK可延缓小鼠子宫内膜增生的疾病进展

5.结论

不足与展望

参考文献

中英文对照缩写词表

附录

硕士期间发表论文

致谢