玉簪叶绿素生物合成途径中关键酶基因HrHEMA、HrPOR和HrCAO的克隆及功能研究

目录

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第一章 文献综述

1.1 玉簪属植物概述

1.1.1 栽培育种与园艺研究

1.1.2 药用价值研究

1.2 原体原套结构学说

1.3 叶绿体形态结构及叶绿素生物合成关键酶基因与复色叶形成相关性

1.3.1 叶绿体形态结构变异与复色叶形成相关性

1.3.2 叶绿素生物合成关键酶基因与复色叶形成相关性

1.3.3 叶绿素生物合成途径中关键酶基因概述

1.4 VIGS介导RNA沉默技术

1.4.1 VIGS 技术原理

1.4.2 VIGS 技术发展应用

1.4.3 VIGS 技术的优缺点

1.5 研究的目的与意义

1.6 研究技术路线

第二章 叶绿素生物合成途径中关键酶基因的克隆及功能分析

2.1 材料及方法

2.1.1 材料及其生长条件

2.1.2 试剂及设备

2.1.3 目的基因的克隆

2.1.4 目的基因编码蛋白质功能分析

2.1.5 目的基因的亚细胞定位

2.2 结果与分析

2.2.1 目的基因的克隆

2.2.2 目的基因编码蛋白质的功能分析

2.2.3 目的基因的亚细胞定位分析

2.3 讨论与小结

2.3.1 谷氨酰tRNA还原酶基因HrHEMA

2.3.2 原叶绿素酸酯氧化还原酶基因HrPOR

2.3.3 叶绿素酸酯a氧化酶基因HrCAO

第三章 叶绿素生物合成途径中关键酶基因的载体构建及转化

3.1 材料及方法

3.1.1 材料及其生长条件

3.1.2 试剂及引物

3.1.3 过表达载体pCAMBIA3301 的构建

3.1.4 过表达载体pCAMBIA3301 重组质粒的烟草转化

3.1.5 VIGs 载体pTRV2 的构建

3.1.6 pTRV2重组质粒的转化

3.1.6.3 VIGS 沉默基因表达量的变化

3.2 结果与分析

3.2.1 过表达载体的构建

3.2.2 克隆产物转化与阳性克隆检测

3.2.3 过表达载体重组质粒的烟草转化

3.2.4 VIGs 载体pTRV2 的构建

3.2.5 pTRV2重组质粒载体克隆产物转化与阳性克隆检测

3.2.6 pTRV2重组质粒的转化

3.3 讨论与小结

3.3.1 研究载体的选择

3.3.2 转基因烟草的Basta 浓度的筛选

3.3.3 转基因烟草的表型变化

3.3.4 外源基因的遗传特性

3.3.5 VIGS 遗传转化

第四章 玉簪叶绿素生物合成途径中关键酶基因对叶色变化的影响

4.1 材料及方法

4.1.1 材料及其生长条件

4.1.2 试剂及设备

4.1.3 叶片超微结构观察

4.1.4转基因烟草的qRT-PCR

4.1.5 转基因烟草叶片叶绿素生物合成途径中间产物的测定

4.1.6 植物叶片生理生化指标的测定

4.2 结果与分析

4.2.2 不同光照条件下转基因烟草的形态变化

4.2.3 不同光照条件下转基因烟草的qRT-PCR 分析

4.2.4 δ－氨基乙酰丙酸（ALA）含量变化

4.2.5 胆色素原(PBG)含量测定

4.2.6 尿卟啉原III ( Uroporphyrinogen III)和粪卟啉原III（Coprogen III)含量测定

4.2.7 原卟啉IX ( Protoporphyrin IX )、镁原卟啉IX（Mg-Proto IX）、原叶绿素酸脂(Pchlide)含量测定

4.2.8 叶绿素及类胡萝卜素含量测定

4.2.9 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测

4.2.10 过氧化物歧化酶（POD）活性检测

4.2.11 丙二醛（MDA）含量检测

4.2.12 脯氨酸（Pro）含量检测

4.2.13 过氧化酶（CAT）活性检测

4.3 讨论与小结

4.3.1叶绿体超微结构观察

4.3.2 不同光照条件下野生型烟草植株与各转基因烟草植株的分析比较

第五章 结论

创新点

参考文献

附录A

附录B

作者简介

致谢