声明
第一章 绪论
1.1香茅醛的用途与合成
1.1.1（R）-香茅醛的用途
1.1.2（R）-香茅醛的合成
1.2 （R）-香茅醛的生物合成研究现状
1.3 老黄酶（Old Yellow Enzyme）简介
1.3.1 老黄酶的来源、类别和作用
1.3.2 老黄酶的催化机理和底物范围
1.3.3 老黄酶的改造
1.4 研究背景，研究目的和研究方案
1.4.1 研究背景
1.4.2 研究目的
1.4.3 研究方案
第二章 基于半理性设计改造老黄酶OYE3 的对映体选择性与底物利用能力
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 质粒和菌株重组质粒
2.2.2 试剂
2.2.3 培养基
2.2.5 主要仪器
2.3 实验方法
2.3.1 重组质粒转化
2.3.2 目的蛋白表达纯化
2.3.3 蛋白浓度检测
2.3.4 （E）-柠檬醛和（Z）-柠檬醛的制备
2.3.5 催化反应
2.3.6 气相检测
2.3.7 突变库构建
2.3.8 感受态细胞 BL21(DE3)和DH5α制备
2.3.9 同源建模和分子对接
2.4 结果与讨论
2.4.1 OYE3 突变位点选择
2.4.2 OYE3突变酶构建，表达纯化和催化
2.4.3 OYE3 S296和 W116位点替代氨基酸优化
2.4.4 OYE3 S296位点和 W116位点组合突变
2.4.5 分子对接结果与分析
2.5 本章讨论与小结
第三章 突变子OYE3 S296F/W116G 催化不对称合成（R）-香茅醛的条件优化
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 菌株
3.2.2 试剂
3.2.3 培养基
3.2.4 缓冲液
3.2.5 主要仪器
3.3 实验方法
3.3.1 菌种培养
3.3.2 蛋白表达与纯化
3.3.3 蛋白浓度检测
3.3.4 酶活检测
3.3.5 底物制备
3.3.6 催化反应
3.3.7 气相检测
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 S296F/W116G 和GDH酶的分离纯化
3.4.2 温度对S296F/W116G 的催化活力影响
3.4.3 pH对S296F/W116G 的催化活力影响
3.4.4 NADP+浓度对产物得率的影响
3.4.5 辅底物D-葡萄糖浓度对催化反应的影响
3.4.6 GDH与S296F/W116G 酶量添加比例对产物得率的影响
3.4.7 20种氨基酸对（Z）-柠檬醛产物得率的影响
3.4.8 丝氨酸浓度对（Z）-柠檬醛产物得率的影响
3.4.9 最佳催化条件下丝氨酸对三种底物产物得率的影响
3.5 本章讨论与小结
第四章 突变子OYE3 S296F/W116G 与葡萄糖脱氢酶GDH的融合表达与全细胞催化
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 质粒与菌株
4.2.2 试剂
4.2.3 培养基
4.2.4 缓冲液
4.2.5 主要仪器
4.3 实验方法
4.3.1 老黄酶OYE3 与葡萄糖脱氢酶GDH融合表达质粒的构建
4.3.2 老黄酶OYE3 与葡萄糖脱氢酶GDH融合表达菌体构建和融合酶表达
4.3.3 S296F/W116G 和GDH融合表达菌体构建
4.3.4 老黄酶OYE3（或S296F/W116G）和葡萄糖脱氢酶 GDH单表达菌全细胞催化100 mM（E）-柠檬醛
4.3.5 融合表达菌体全细胞催化（E）-柠檬醛的实验
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 融合表达质粒构建
4.4.2 融合表达菌构建和融合酶诱导
4.4.3 单表达菌与融合表达菌全细胞催化 100 mM（E）-柠檬醛结果
4.5 本章小结与讨论
第五章 总结与展望
5.1 总结
5.2 展望
致谢
参考文献
作者简介
1 作者简历
2 攻读博士/硕士学位期间发表的学术论文
3 参与的科研项目及获奖情况4 发明专利
学位论文数据集
浙江工业大学;
