苹果采后苹果酸含量及其转运体基因MdALMT9调控机制研究

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第一章文献综述

1.1 引言

1.2 果实中的有机酸

1.3 苹果酸的代谢研究

1.3.1 苹果酸参与的生理活动及功能

1.3.2 苹果酸代谢的关键酶

1.4 果实中有机酸代谢的调控

1.5 苹果酸的转运

1.6 果实有机酸形成的分子生物学研究

1.7本研究的目的、意义及主要内容

1.7.1本研究的目的及意义

1.7.2主要研究内容

第二章 γ-GABA和CaCl2处理对苹果采后贮藏期间有机酸代谢的影响

2.1 试验材料和方法

2.1.1 试验材料和处理

2.1.2 测定指标及方法

2.2 结果与分析

2.2.1 γ-GABA处理对苹果采后贮藏期间有机酸代谢的影响

2.2.2 CaCl2处理对苹果采后贮藏期间有机酸代谢的影响

2.3 讨论

2.3.1 γ-GABA处理对采后贮藏过程中苹果酸代谢的影响

2.3.2 CaCl2处理对采后贮藏过程中苹果酸代谢的影响

2.4 小结

第三章不同品种苹果果实采后贮藏期间苹果酸代谢特点研究

3.1 试验材料及方法

3.1.1 试验材料及处理

3.1.2 试验方法

3.2 结果及分析

3.2.1 不同品种苹果采后贮藏期间苹果酸含量的变化

3.2.2 乙烯及1-MCP处理对不同品种苹果苹果酸含量的影响

3.2.3 RNA-seq筛选果实衰老进程中呼吸代谢途径差异表达基因

3.2.4 乙烯及1-MCP处理对苹果酸代谢关键基因表达的影响

3.3 讨论

3.4 小结

第四章 苹果铝诱导苹果酸转运体基因MdALMT9的克隆及功能分析

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.2.1 RNA提取与cDNA合成

4.2.2 基因克隆

4.2.3 生物信息学分析

4.2.4 MdALMT9亚细胞定位

4.2.5 农杆菌介导番茄转化

4.2.6 番茄果实苹果酸和柠檬酸含量检测

4.2.7 启动子克隆及分析

4.2.8 农杆菌介导瞬时侵染番茄

4.2.9 GUS活性测定及GUS组织化学染色

4.3 结果及分析

4.3.1 MdALMT9克隆及序列分析

4.3.2 MdALMT9亚细胞定位及表达特性分析

4.3.3 MdALMT9在苹果采后贮藏过程中的表达特性

4.3.4 过表达MdALMT9促进番茄果实苹果酸和柠檬酸的积累

4.3.5 MdALMT9启动子克隆及启动活性分析

4.4 讨论

4.5 小结

第五章铝诱导苹果酸转运体基因MdALMT9的调控机制研究

5.1 试验材料及处理

5.2 试验方法

5.2.2 烟草双荧光素酶检测

5.2.3 酵母单杂交试验

5.2.4 原核表达

5.2.5 凝胶迁移实验（EMSA）

5.2.6 苹果果实瞬时沉默试验

5.2.7 苹果愈伤组织遗传转化

5.3 结果及分析

5.3.1 AP2/ERF家族转录因子筛选

5.3.2 乙烯响应转录因子对MdALMT9启动子转录活性的调控

5.3.3 乙烯响应转录因子MdERF017的自激活验证

5.3.4 EMSA及酵母单杂交验证

5.3.6 番茄同源基因的调控效应验证

5.3.6 MdERF017和MdERF017-like亚细胞定位及表达特性分析

5.3.7 过表达MdERF017和MdERF017-like促进苹果愈伤组织苹果酸积累

5.3.8 瞬时沉默MdERF017、MdERF017-like导致苹果果实苹果酸含量下降

5.3.9 MdERF017、MdERF017-like参与逆境胁迫响应

5.4 讨论

5.5 小结

第六章 结论与创新点

6.1 结论

6.2 创新点

参考文献

附录

缩略词

致谢

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