昆虫细胞基因工程人生长激素的纯化和性质研究

摘要

真核细胞基因工程合成的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormone,thGH)在医学和农业领域具有很大的应用价值 .该实验运用疏水相互色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素进行了纯化.含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后,以疏水相互作用色谱(Phenyl Sepharose CL-4B)浓缩,有效地去除了杂蛋白,得到thGH粗提品;再经过免疫亲和色谱纯化,得到了高纯度的rhGH.经放射免疫法和Western杂交法分析,证明纯化的rhGH与天然的人生长加邢嗤拿庖呋盍Γ 经SDS凝胶电泳测定其分子量为:22,000道尔顿;等电点聚焦法测定其等电点力:4.9.这些性质均与天然的人生长激素相符合.

目录

前言

材料与方法

1.主要的材料与仪器

2.试验方法

2.1昆虫细胞培养液中重组人生长激素的提取和纯化

2.2重组人生长激素的检测和鉴定

试验结果

1.疏水作用色谱提取rhGH

1.1 Phenyl Sepharose CL-4B对rhGH的最佳吸附试验

1.2疏水作用色谱对rhGH粗提纯的结果

2.亲和层析纯化rhGH的结果

2.1抗体偶联的结果

2.2最佳吸附时间的选择

2.3亲和层析纯化rhGH的结果

3.终产物的纯度和回收率

4.重组人生长激素的性质鉴定

4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

4.2 rhGH的等电点聚胶分析

4.3 Western杂交鉴定纯化的rhGH

5.小结

分析和讨论

1.关于表达系统

1.1杆状病毒表达系统

1.2昆虫细胞中蛋白质的翻译后修饰

2.关于培养液的浓缩

2.1疏水层析

2.2超滤

3.关于亲和层析

3.1抗体与CNBr-activated Sepharose 4B偶联中的问题

3 2影响亲和层析中hGH吸附的因素

3.3亲和层析的解析系统

3 4亲和层析的局限性

4.关于试验结果

5.小结

致谢

参考文献