氯美昔布对Bcl-2介导的人NSCLC细胞凋亡的调控研究

摘要

本研究探讨了LUM的体外抑制NSCLC细胞增殖作用及与DOC联合使用时的增效作用，并初步研究了其作用机制，尤其是探讨LUM调节Bcl-2介导的凋亡是否通过MAPK(ERK)信号转导通路，以进一步阐明COX-2表达与NSCLC发生发展的关系，为COX-2抑制剂可能预防和治疗肺癌提供理论依据。 研究表明，LUM对A549和NCI-H460细胞的增殖有抑制作用，且呈明显的剂量和时间效应关系；LUM与DOC联合应用具有明显的协同作用。LUM抑制A549和NCI-H460细胞增殖作用的机制可能与诱导细胞凋亡、改变细胞周期、降低PGE2水平、上调cAMP的水平有关，且可能涉及到COX-2依赖性和COX-2非依赖性两条途径。LUM可通过MAPK(ERK)信号转导通路调节肺癌细胞产生Bcl-2，进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降而引起肿瘤细胞凋亡。

目录

论文说明:英文缩略词表

声明

1前言

2实验材料

2.1细胞株

2.2药物与试剂

2.3仪器与设备

3实验方法

3.1细胞的培养与传代

3.2细胞活力测定

3.3体外增殖抑制实验

3.4药物联合作用评价

3.5吖啶橙荧光染色

3.6流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化

3.7 PGE2含量的测定

3.8 cAMP水平的测定

3.9蛋白定量

3.10 Western blot的操作步骤

3.11数据的统计处理

4.结果

4.1 LUM对A549和NCI-H460细胞增殖的影响

4.1.1 LUM对A549和NCI-H46细胞增殖抑制作用的量效关系

4.1.2 LUM对A549和NCI-H460细胞增殖抑制作用的时效关系

4.2 LUM与DOC联合应用对A549和NCI-H460细胞增殖的协同抑制作用

4.3 LUM诱导A549和NCI-H460细胞凋亡的形态学观察

4.3.1吖啶橙(AO)染色观察LUM单药凋亡细胞形态学特征

4.3.2吖啶橙(AO)染色观察LUM与DOC联合应用的细胞凋亡形态学特征

4.4 LUM诱导A549和NCI-H460细胞凋亡的流式细胞仪分析

4.4.1 LUM对A549和NCI-H460细胞周期影响的量效关系

4.4.2 LUM诱导A549和NCI-H460细胞凋亡的时效关系

4.4.3流式细胞仪检测LUM与DOC联合应用对A549和NCI-H460细胞凋亡的影响

4.5 LUM对A549和NCI-H460细胞PGE2及cAMP产生的影响

4.6 LUM对A549和NCI-H460细胞COX-2蛋白表达的影响

4.7 LUM调节A549和NCI-H460细胞中Bcl-2的信号通路

4.8 LUM对A549和NCI-H460细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

5讨论

5.1 LUM对A549和NCI-H460细胞的增殖抑制作用

5.2LUM与DOC对人NSCLC细胞增殖的抑制作用

5.3 LUM抑制NSCLC作用的机制探讨

5.3.1 LUM诱导A549和NCI-H460细胞的凋亡作用

5.3.2 LUM对A549和NCI-H460细胞周期的影响

5.3.3LUM对A549和NCI-H460细胞PGE2及cAMP产生的影响

5.3.4 LUM对A549和NCI-H460细胞COX-2蛋白表达的影响

5.3.5 LUM调节A549和NCI-H460细胞中Bcl-2的信号通路

5.3.6 LUM对A549和NCI-H460细胞Bcl-2和Bax表达的影响

6.结论

参考文献

附录:个人简历

致谢

综述:环氧化酶2与非小细胞肺癌关系研究进展