TSLP通过JAK1/AKT信号通路促进腰椎间盘突出重吸收的机制研究

摘要

目的：通过实验证实TSLP通过信号传导通路介导炎症反应，从而介导相关因子的表达，抑制髓核细胞凋亡并且对突出或者脱出的腰椎髓核组织进行重新吸收，并以此为根基重新审视炎症反应这把双刃剑，并加以利用，这可能为延缓椎间盘退变提供新的思路。　　方法：1.取材均来自于8周龄雄性SD大鼠，分属于各实验部分，取其间盘，去除纤维环和软骨板进行组织培养。将所培养的间盘组织分为实验组和对照组，实验组加入TSLP，同时将实验组和对照组进行恒温培养，在不同的时间段分别对实验组和对照组的间盘组织进行酶联免疫吸附法（ELISA）测定，在ELISA检测仪上，于450nm处，测定各孔吸光度值。记录MCP-1、MMP3、IL-6因子的表达情况。2.同样方法培养雄性SD大鼠，取培养完好的间盘组织分为对照组、TSLP组及TSLP+JAK1抑制剂组，在抑制组中加入免疫抑制剂同时进行恒温培养，在不同的时间段分别对各组间盘组织进行蛋白的表达测定并曝光显影。而后取培养结束后的大鼠髓核组织，用4％多聚甲醛固定组织，脱水处理后，石蜡包被，进行组织切片，厚度5μM，利用免疫组织化学染色法对切片进行处理后，用光学显微镜观察阳性细胞的表达及分布并记录以完成统计学的分析。同时对该实验过程中的MCP-1、MMP3、IL-6表达进行酶联免疫吸附法（ELISA）测定。3.以相同的方式方法对准备好的SD大鼠椎间组织进行对照组、TSLP组及TSLP+Akt抑制剂（LY294002）组在不同的时间段p-Akt、Akt、p-NFкB、NF-кB和β-actin的Western blot法测定表达，大鼠髓核组织培养结束后，用4%多聚甲醛固定组织，脱水处理后，石蜡包被，进行组织切片，厚度5μM，组织切片用抗p-NFкB抗体或正常山羊血清孵育.利用免疫组织化学染色法检测磷酸化JAK1、Akt、NF-kB的水平，光学显微镜下观察阳性细胞的表达及分布，同时利用相同方法对该实验过程中的MCP-1、MMP3、IL-6表达进行酶联免疫吸附法（ELISA）测定。　　结论：在腰椎间盘突出重吸收过程TSLP作为炎症反应的总开关，激活JAK1后活化AKT通路，再通过NF-kB调节下游因子的转录，促进间盘的重吸收，提示在间盘重吸收的过程中TSLP通过信号通路引起相关反应贯穿始终。

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前言

1．实验材料及方法

1.1酶联免疫吸附试验（ELISA）

1.2蛋白质印渍技术（Western Blotting）

1.3免疫组织化学

2．实验结果

2.2酶联免疫吸附试验（ELISA）

2.3统计学分析

3.免疫组化实验

3.1结果判定

3.2 统计学分析

4.Western Blotting实验

讨论

1. 实验标本的选取

2酶联免疫吸附试验

3.免疫组化实验

4，Western Blotting

展望

结论

参考文献

文献综述:腰椎间盘突出症治疗研究进展

攻读学位期间发表文章情况

个 人 简 历

致谢