益气逐瘀利水方促进腰椎间盘突出后重吸收的细胞学研究及机理探讨

摘要

目的:通过体外培养人腰椎间盘突出退变髓核细胞,观察益气逐瘀利水方对人破裂型与非破裂型退变髓核细胞凋亡、II型胶原(Col-II)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的影响;并进一步通过人巨噬细胞与人退变髓核细胞的共培养,模拟体内内环境,观察益气逐瘀利水方对共培养细胞 Col-II、TIMP-1、Aggrecan的影响,探讨重吸收的分子机制,以进一步研究益气逐瘀利水方促进腰椎间盘突出后重吸收的机理。　　方法:(1)获取6例人突出腰椎间盘髓核组织,其中破裂型、非破裂型各3例,进行组织块培养法体外培养,同时利用SD大鼠提取含药血清,分为实验组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,利用流式细胞仪,检测益气逐瘀利水方对人退变髓核细胞凋亡的影响。(2)将实验组分为中剂量组及高剂量组,利用RealtimePCR、ELISA检测益气逐瘀利水方对人退变髓核细胞Col-II、TIMP-1、Aggrecan mRNA及蛋白的影响。(3)将人巨噬细胞与人退变髓核细胞按1:3共培养后,分组为DMEM组、生理盐水对照组、低剂量组、中剂量组及高剂量组,利用 RealtimePCR、ELISA检测益气逐瘀利水方对共培养细胞 Col-II、TIMP-1、Aggrecan mRNA及蛋白的影响。　　结果:(1)中、高剂量组益气逐瘀利水方均可有效促进人破裂型及非破裂型退变髓核细胞的凋亡。(2)中剂量组益气逐瘀利水方可上调非破裂型退变髓核细胞 Aggrecan mRNA、破裂型退变髓核细胞 Col-II、Aggrecan蛋白的表达;高剂量组益气逐瘀利水方可上调破裂型及非破裂型Col-II mRNA及蛋白表达,破裂型退变髓核细胞Aggrecan mRNA、非破裂型Aggracan蛋白的表达。未检测出对TIMP-1表达的影响。(3)成功将人巨噬细胞与人退变髓核细胞共培养,高剂量的益气逐瘀利水方抑制破裂型共培养细胞Col-II、Aggrecan、TIMP-1 mRNA及蛋白的表达,同时抑制非破裂型共培养细胞Col-II mRNA、Aggrecan蛋白的表达。　　结论:(1)益气逐瘀利水方能促进人破裂型及非破裂型退变髓核细胞凋亡,使突出变性组织变小利于重吸收。(2)益气逐瘀利水方能够通过改善退变腰椎间盘细胞的胶原和蛋白聚糖变化,防止变性椎间盘进一步退变突出。(3)通过促进巨噬细胞对退变髓核组织 Col-II、Aggrecan的分解,利于变性髓核的重吸收。此外同时发现,益气逐瘀利水方能抑制破裂型退变髓核细胞 TIMP-1的表达,提示可能刺激 MMPs发挥降解作用,加速变性髓核细胞基质的分解。基于以上研究结论,最终得出益气逐瘀利水方首先能促进腰椎间盘突出退变髓核细胞的凋亡,使变性的椎间盘细胞丧失殆尽而利于重吸收;其次,通过促进Col-II及 Aggrecan的表达,修复退变髓核组织并缓解进一步退变;最后,通过促进巨噬细胞对退变髓核组织Col-II、Aggrecan的分解,利于变性髓核的重吸收。此外同时发现,益气逐瘀利水方能抑制破裂型退变髓核细胞 TIMP-1的表达,提示可能刺激MMPs发挥降解作用,加速变性髓核细胞基质的分解。

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引言

正文

研究一 细胞凋亡（双染法）检测益气逐瘀利水方对人突出髓核细胞的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 统计分析

4 结果

5 讨论

研究二 益气逐瘀利水方对人突出髓核细胞Col-II、Aggrecan、TIMP-1的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 统计方法

4 结果

5 讨论

研究三 益气逐瘀利水方对共培养细胞Col-II、Aggrecan、TIMP-1的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 统计方法

4 结果

5 讨论

结论

1 全文小结

2 全文讨论

3 展望

参考文献

综述

缩 略 词 表

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果