转木薯蔗糖合酶Ⅰ基因培育马铃薯新种质的初步研究

目录

声明

摘要

1前言

1．1木薯的简介

1．1．1木薯的生物学特性

1．1．2木薯产业现状

1．1．3木薯的经济价值及应用

1．2淀粉的生物合成和所涉及主要酶类

1．2．1淀粉的生物合成

1．2．2腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)

1．2．3淀粉合酶(SS)

1．2．4淀粉分支酶(SBE)

1．2．5去分支酶(DBE)

1．3蔗糖合酶的简介及功能

1．3．1蔗糖合酶的简介

1．3．2参与淀粉生物合成

1．3．3参与纤维素合成及次生壁形成

1．3．4参与非生物胁迫

1．4马铃薯

1．4．1马铃薯简介

1．4．2马铃薯的经济价值

1．4．3马铃薯遗传转化

1．5研究目的与意义

1．5．1研究目的

1．5．2研究意义

1．6研究基础

1．7技术路线

2材料与方法

2．1试验材料

2．1．1植物材料

2．1．2菌株和载体

2．1．3试剂

2．1．4主要仪器

2．2木薯Sus1基因的克隆

2．2．1木薯KU50总RNA提取

2．2．2反转录合成第一链cDNA

2．2．3 PCR扩增目的片段

2．2．4目的片段的回收

2．2．5大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备

2．2．6目的片段的TA克隆及测序

2．3 CaMV35Spro∷MeSus1载体构建

2．3．2 pGEM-MeSus1质粒和pOE3．1plus质粒的酶切、连接及转化

2．3．3 CaMV35Spro∷MeSus1质粒提取与鉴定

2．4转MeSus1马铃薯的遗传转化

2．4．1野生型E3组培苗的培养

2．4．2农杆菌菌株LBA4404感受态细胞的制备

2．4．3 CaMV35Spro∷MeSus1载体转化农杆菌LBA4404感受态细胞

2．4．4农杆菌介导马铃薯茎秆转化

2．4．5转基因马铃薯阳性苗的鉴定

2．5转基因株系的扩繁与移栽

2．6转基因马铃薯生理生化指标的测定

2．6．1马铃薯块茎还原糖含量测定

2．6．2马铃薯块茎干物质含量测定

2．6．3马铃薯块茎淀粉含量测定

3结果与分析

3．1．2 MeSus1转化马铃薯

3．1．3野生型马铃薯目标基因及内参基因检测

3．1．4转MeSus1马铃薯植株鉴定

3．1．5转MeSus1基因马铃薯株系扩繁与移栽

3．2转基因马铃薯生理生化指标的测定

3．2．1马铃薯转化株系块茎还原糖含量分析

3．2．2马铃薯转化株系块茎千物质含量分析

3．2．3马铃薯转化株系块茎淀粉含量分析

4讨论

4．3转MeSus1基因马铃薯植株生理指标与野生对照组的比较

4．4影响马铃薯食品口感的遗传因素

5结论

后续工作

参考文献

附录

致谢