声明
摘要
1文献综述
1．1马铃薯的重要性
1．2植物基因工程研究进展
1．2．1植物基因工程简述
1．2．2植物基因工程基本方法及原理
1．2．3植物基因工程的应用
1．2．4转基因马铃薯研究进展
1．3丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)的研究进展
1．3．2PPDK基因的功能
1．3．3PPDK基因的活性调控
1．4本研究的目的意义
1．5技术路线
2材料与方法
2．1试验材料
2．1．1材料
2．1．2主要实验仪器
2．1．3主要实验试剂及培养基
2．2木薯MechlPPDK基因过表达载体转化马铃薯
2．3转基因马铃薯阳性鉴定
2．3．1转基因马铃薯DNA的提取与阳性植株鉴定
2．3．2转基因马铃薯总RNA提取和反转录检测
2．4马铃薯的种植
2．4．1组培苗的继代及壮苗
2．4．2组培苗的炼苗及移栽
2．4．3马铃薯块茎的催芽及种植
2．5转基因马铃薯的Southern-Blot分析
2．5．1Southern-blot相关试剂的配制
2．5．2CTAB法大量提取马铃薯基因组DNA
2．5．3转基因材料基因组DNA酶切
2．5．4DIG-DNA探针制备
2．5．5转膜
2．5．6DNA杂交
2．5．7洗膜及显色
2．6转基因马铃薯生理指标及产量性状的测定
2．6．1马铃薯功能叶片叶绿素含量测定
2．6．2马铃薯功能叶片净光合速率测定
2．6．3马铃薯块茎芽眼数测定
2．6．4马铃薯块茎长宽比测定
2．6．6苯酚-硫酸法测定马铃薯块茎淀粉含量
2．6．7马铃薯块茎葡萄糖、果糖及蔗糖含量测定
2．7木薯MechlPPDK基因在转基因马铃薯不同组织中的表达量
2．8数据分析
3结果与分析
3．1MechlPPDK基因过表达载体转化马铃薯
3．2转基因马铃薯分子鉴定
3．2．1转基因马铃薯内参及目标基因检测
3．2．3转MechlPPDK基因马铃薯的Southern-blot分析
3．3转基因株系的繁殖、移栽和种植
3．3．1转基因株系组培苗的繁殖和移栽
3．3．2转基因株系块茎发芽性状变异
3．4转基因马铃薯生理指标及产量性状变异
3．4．1转基因马铃薯功能叶片叶绿素含量和净光合速率的测定
3．4．2转基因马铃薯长宽比统计
3．4．3转基因马铃薯芽眼数统计
4．4．4转基因马铃薯产量性状
3．4．5转基因马铃薯葡萄糖、果糖和蔗糖含量的测定
3．4．6MechlPPDK基因在转基因马铃薯不同部位的表达量
4讨论
4．1马铃薯组培苗及种薯种植优化
4．2转MechlPPDK基因马铃薯植株生理指标与生长速率分析
4．3转MechlPPDK基因马铃薯植株表型与产量性状分析
5结论
6本研究的后续工作
参考文献
附录
致谢
南京农业大学;
