声明
摘要
第一章绪论
1．1木聚糖酶简介
1．1．1木聚糖酶的类型
1．1．2木聚糖酶的催化性质
1．1．3木聚糖酶的应用
1．1．4木聚糖酶的研究进展
1．2蛋白质的热稳定性
1．2．1蛋白质的热稳定性类型
1．2．2研究蛋白质热稳定性的常用实验方法
1．3影响蛋白质热稳定性的因素
1．4利用生物信息学工具来计算蛋白质热稳定性
1．5提高蛋白质热稳定性的策略
1．6本研究的设计思路及目的意义
第二章基于结构的半理性设计来提高木聚糖酶热稳定性
2．1引言
2．2实验材料
2．2．1质粒与菌株
2．2．2工具酶、试剂盒和生化试剂
2．2．3引物合成与核酸测序
2．2．4培养基及有关溶液的配制
2．2．5主要实验仪器
2．2．6计算机硬件配置
2．2．7分析软件
2．3实验方法
2．3．1蛋白质模型处理
2．3．2分子动力学模拟
2．3．3原核表达重组质粒的构建
2．3．4木聚糖酶定点突变体的构建
2．3．5野生型和突变体基因的原核表达及蛋白纯化
2．3．6木聚糖酶的酶学性质测定
2．4结果
2．4．1分子动力学模拟确定突变位点
2．4．2突变体的分子动力学模拟
2．4．3野生型和突变体基因的表达及蛋白质纯化
2．4．4酶活性测定
2．5小结
第三章计算机辅助筛选热稳定性提高的木聚糖酶
3．1引言
3．2实验材料
3．2．1质粒与菌株
3．2．2工具酶、试剂盒和生化试剂
3．2．3引物合成与核酸测序
3．2．4培养基及有关溶液的配制
3．2．5主要实验仪器
3．2．6分析软件
3．3实验方法
3．3．1 Modeller、Foldx软件的下载安装及使用
3．3．2蛋白质全序列饱和突变库的构建
3．3．3蛋白质折叠自由能差值的计算
3．3．4根据序列同源性筛选突变体
3．3．5分子动力学模拟排除假阳性
3．3．6原核表达重组质粒的构建
3．3．7木聚糖酶定点突变体的构建
3．3．8蛋白质小量快速纯化
3．3．9酶学性质快速测定
3．4实验结果
3．4．1蛋白质饱和突变体库的构建
3．4．2蛋白质折叠自由能差值的筛选
3．4．3蛋白质同源性的筛选
3．4．4分子动力学模拟排除假阳性
3．4．5蛋白质小量快速纯化
3．4．6酶学性质快速测定
3．5小结
第四章全文结论
4．1结论
4．2特色与创新
4．3后续工作
参考文献
致谢
攻读硕士期间取得的主要学术成果
南京农业大学;
