鹅FSHβ基因部分序列克隆及外显子3SNPs与产蛋性能相关性研究

摘要

促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素,在下丘脑-垂体-性腺繁殖轴中起到重要的作用。FSH由α和β两个亚基组成,其中α亚基为hCG、LH、TSH等糖蛋白激素所共有；而特异性的β亚基则决定其特异性结合位点及其生物学功能。研究表明,禽类FSH表达量的高低与家禽的繁殖性能密切相关,FSHB可作为与产蛋性能相关的候选基因之一。 本研究以我国优良的中型鹅品种--皖西白鹅(n=112)和引入的莱茵鹅(n=64)为研究素材,以FSHβ基因作为与产蛋性状的候选基因,通过比较基因组学方法,应用Dnastar和Primer Premier 5.0软件,根据GenBank登录的鸡FSHβ(GenBankAccession no. AF467082)、猪FSHβ(GenBank Accession no. D00621)、牛FSHβ(GenBank Accession no. M83753)、鼠FSHβ(GenBank Accession no. U12932)基因的序列,共设计了2对引物,对鹅FSHβ基因的Exon2下游至Exon3上游的序列及外显子3的部分序列进行了克隆测序：运用PCR-SSCP法检测皖西白鹅和莱茵鹅FSHB基因外显子3基因突变位点,并分析基因多态性及其与皖西白鹅产蛋性状间的相关性。 克隆了皖西白鹅和莱茵鹅FSHβ基因部分序列(GenBank登录号:EU252532)。序列比较表明,皖西白鹅FSHβ基因片段与莱茵鹅的同源性分别为99％,与家鸡的同源性为64％；克隆的外显子3部分序列与家鸡序列同源性为95％。 对皖西白鹅和莱茵鹅FSHD基因外显子3部分序列分别进行了多态性检测,结果表明,外显子3扩增片段经SSCP检测均发现1个SNP位点(C-126T)。 群体遗传学分析表明,皖西白鹅P2引物检测的两个等位基因,频率分别为0.87和0.13,三种基因型(AA、AB和BB)频率分别为0.78、0.19和0.03,经x2适合度检验,群体在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。莱茵鹅P2引物检测的等位基因频率分别为0.26和0.74：其对应的基因型(CC、CD、DD)频率分别为0.11、0.3和0.59,经x2检验,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。 相关分析表明,在皖西白鹅群体中,P2引物检测出的三种基因型与产蛋性能间有显著差异(P<0.05),BB型产蛋量显著高于AA型和AB型。莱茵鹅群体P2引物的三种基因型与产蛋性能间有显著差异(P<0.05),CC型产蛋量显著高于CD型和DD型。

目录

文摘

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论文说明：本论文中所用缩略词

声明

文献综述

1促卵泡激素研究进展

1.1促卵泡激素及其生物学效应

1.2 FSHβ基因的表达调控

1.3 FSHβ基因结构

1.4 FSHβ基因突变与动物生殖关系的研究

2 PCR-SSCP技术和SNPs

2.1 PCR-SSCP技术

引言

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验样本

1.1.2主要仪器设备

1.1.3药品和酶

1.1.4常规溶液及试剂配制

1.1.5菌株和载体

1.1.6分析工具软件

1.2实验方法

1.2.1血样的采集

1.2.2 DNA提取

1.2.3 DNA浓度和纯度测定

1.2.4引物设计

1.2.5最佳PCR反应条件

1.2.6琼脂糖凝胶电泳检测

1.2.7单链构像多态性检测(SSCP)

1.2.8 FSHβ基因序列克隆和测序

1.2.9数据统计分析方法

2结果与分析

2.1 FSHβ基因部分序列的克隆与测序

2.1.1皖西白鹅与莱茵鹅FSHβ基因部分序列PCR扩增

2.1.2皖西白鹅、莱茵鹅和家鸡FSHβ基因部分序列测定及同源性比较

2.2 FSHβ基因外显子3部分序列SSCP检测结果

2.2.1皖西白鹅SSCP电泳结果

2.2.2莱茵鹅SSCP电泳结果

2.2.3皖西白鹅和莱茵鹅外显子3有多态性片段的测序

2.3皖西白鹅与莱茵鹅氨基酸比较

2.4皖西白鹅与莱茵鹅外显子3部分序列酶切位点的比较

2.5基因群体遗传学分析

2.5.1 FSHβ基因频率和基因型频率

2.5.2 FSHp基因Hardy-Weinberg平衡检验

2.5.3 FSHβ基因的遗传特性分析

2.5.4基因多态性位点与鹅产蛋性能的相关性分析

3讨论

3.1鹅FSHβ基因的部分序列比较分析

3.2鹅FSHβ基因外显子3的突变及其多态性分析

3.3皖西白鹅与莱茵鹅FSHβ基因群体遗传结构

3.4鹅FSHβ基因型与产蛋性能的相关性分析

4结论

参考文献

致谢

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