散发性结直肠癌中hMSH2与PTEN表达相关性研究

摘要

目的：胃肠道肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，其中结直肠癌是当前最常见的恶性肿瘤之一。结直肠癌的发生发展是一个由遗传和环境因素共同参与的多方面、多步骤的发展过程，涉及多种基因突变的积累，揭示结直肠癌的分子发生机制已成为医学界研究的热点。 微卫星不稳定(microsatellite instability，MSI)是指在复制过程中由于错配修复基因突变而引起的DNA基因组中简单重复序列的增加或丢失，也称为复制错误阳性或复制错误表型。目前人类的错配修复酶(mismatch repair enzyme，MMR)系统含有9个基因：hMLH1，hMIH3，hPMS1，hPMS2，hMSH2，hMSH3，hMSH4，hMSH5，hMSH6.其中hMLM1(human mut-1 homologuel，hMLH1)和hMSH2(humanmut-s homologue 2，hMSH2)是人类错配修复系统中功能最重要的两个基因，主要作用是保持遗传物质的完整性和稳定性，保证DNA复制的忠实性。如果这些错配修复基因功能发生缺陷或活性降低，复制过程中出现的错误不能及时被纠正，就会导致MSI的出现，使整个基因组不稳定，随机突变率增高，从而引起肿瘤的发生。 PTEN基因是1997年由3个研究组分别发现和命名的一种抑癌基因。PTEN基因又名MMAC1和TEP1。PTEN--phosphatase and tensin homolog deleted onchromosome 10，MMAC1-mutated in multide advancecancers, TEP1-TGF β-regulated and epithelial cellenriched phosphatase是迄今发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。本实验采用SP免疫组织化学两步法对42例散发性结直肠癌、相应近端癌旁组织(距癌组织3cm)和远端癌旁组织(距癌组织>10cm)及15例正常结直肠组织进行hMSH2与PTEN蛋白表达的检测。采用Western blot检测42例散发性结直肠癌、相应远端对照组织(距癌组织>10cm)进行hMSH2与PTEN蛋白表达的检测。进一步探讨散发性结直肠癌发病机制及hMSH2与PTEN蛋白表达表达与临床病理之间的关系。 方法： 1.材料与方法 1.1 材料研究对象为在2006年1月至2006年10月期间在河北医科大学第二医院外科接受治疗的42例原发性结直肠癌的患者，取患者癌组织、相应近端癌旁组织(距癌组织3cm)和远端癌旁组织(距癌组织>10cm)及15例正常结直肠组织(为外伤、息肉、溃疡病需手术切除的正常结直肠组织)所取标本备2份。1份迅速放入-80℃冰箱中以保持标本的新鲜备用，另1份经10％福尔马林溶液固定、石蜡包埋、4μm连续切片备用。癌组织均经病理医师确诊。 1.2 主要试剂hMSH2兔抗人多克隆抗体购自Biolegend公司，工作浓度1:100，PTEN兔抗人多克隆抗体购自Biolegend公司，工作浓度1:50，SP免疫组化试剂盒、DAB试剂盒均购于北京中山生物技术公司。 1.3 SP免疫组织化学两步法对42例散发性结直肠癌、相应近端癌旁组织(距癌组织3cm)和远端癌旁组织(距癌组织>10cm)及15例正常结直肠组织进行hMSH2与PTEN蛋白表达的检测。采用Western blot检测42例散发性结直肠癌、相应远端对照组织(距癌组织>10cm)进行hMSH2与PTEN蛋白表达的检测。 2.采用SAS6.12统计软件进行统计学数据处理，计数资料用χ2检验，P<0.05为差异有显著性意义。应用非参数统计中Spearman等级相关对二者在结直肠癌中的表达相互间关系进行分析。 结果： 1.用免疫组织化学法检测hMSH2与PTEN蛋白表达 1.1 hMSH2和PTEN蛋白在结直肠癌组织及对照组织中的表达hMSH2失表达率(阴性表达率)在癌组织为30.95％(13/42)，在近端癌旁组织为19.05％(8/42)，在远端癌旁组织为16.67％(7/42)，在正常结直肠组织为6.67％(1/15)。hMSH2在癌组织中失表达率高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常结直肠组织(P<0.05)，而近端癌旁组织、远端癌旁组织和正常组织表达无明显差异(P>0.05)。 PTEN失表达率在癌组织为42.86％(18/42)，在近端癌旁组织为23.81％(10/42)，在远端癌旁组织为16.67％(7/42)，在正常结直肠组织为6.67％(1/15)。PTEN在癌组织中失表达率高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常结直肠组织(P<0.05)，而近端癌旁组织、远端癌旁组织和正常组织表达缺失率无明显差异(P>0.05)。 1.2 结直肠癌患者癌组织中hMSH2和PTEN蛋白表达特征与I临床病理类型关系 1.2.1 hMSH2失表达率与患者的年龄、性别、肿瘤发生的部位、肿瘤分化程度、侵透浆膜、Dukes分期、淋巴结转移、组织学类型、大体类型均无明显关系(P>0.05)。 1.2.2 PTEN 失表达率与肿瘤分化程度呈负相关(rs=-0.727，P<0.05)，分化程度越高，PTEN失表达率越低。与侵犯深度(侵透浆膜)、Dukes分期、淋巴结转移呈正相关(相关系数分别为rs=0.727、rs=0.718、rs=0.718，P<0.05)。侵润程度越深、肿瘤分期晚期、有淋巴结转移，PTEN失表达率越高。PTEN表达与患者的年龄、性别、肿瘤发生的部位、组织学类型、大体类型均无明显关系(P>0.05)。 2.Western Blot检测结果42例结直肠癌组织与远端对照组织(距癌组织>10cm)相比中hMSH2蛋白有25例出现低表达，其低表达率为59.52％，PTEN有19例出现低表达，其低表达率为45.24％。 3.hMSH2与PTEN蛋白表达在散发性结直肠癌中呈正相关(免疫组化检测中rs=0.679，蛋白印记检测中rs=0.816，P<0.05)。错配修复蛋白hMSH2表达缺失伴有PTEN蛋白表达下调。 结论：(1) hMSH2与PTEN在散发性结直肠癌的呈缺失性表达。(2) PTEN蛋白失表达率与肿瘤分化程度呈负相关，与dukes分期、侵润深度、淋巴结转移均呈正相关。(3) hMSH2与PTEN在散发性结直肠癌中的表达呈正相关。(4) 在散发性结直肠癌发生、发展过程中错配修复蛋白hMSH2表达缺失伴有PTEN蛋白表达下调导致抑癌基因失活，二者共同参与了散发性结直肠癌的发生、发展，导致了恶性肿瘤的形成。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 hMSH2与PTEN在肿瘤中表达

致谢

个人简历