胃癌中hMSH2与PTEN表达相关性研究

摘要

目的：胃癌是常见恶性肿瘤之一。在我国胃癌居各种恶性肿瘤的首位，胃癌年均死亡率为25.53/10万人口，而且有逐渐增加的趋势。大量实验证实癌基因和抑癌基因编码的蛋白大多参与细胞内传导通路。癌基因的激活和抑癌基因的失活造成肿瘤的发生和发展。对于胃癌有关癌基因、抑癌基因的改变进行研究，有助于加深理解胃癌生物学本质及探讨胃癌发生，发展机制及指导临床治疗提供理论依据。 错配修复基因(mismatch repair，MMR)是生物进化过程中的保守基因，具有修复DNA碱基错配，增强DNA复制忠实性，维持基因组稳定性，降低自发性突变的功能。hMSH2是第一个被分离的人类MMR基因，于1993年由Fishel等克隆。研究表明hMSH2与胃癌的发生关系密切。PTEN(phosphataseand tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)为1997年发现的抑癌基因，位于10q23.3，转录产物为515kb mRNA，是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因。目前研究表明PTEN的肿瘤抑制作用，主要是依赖其磷酸酶的活性而实现的。Yang等研究表明：PTEN在胃癌的发生、发展中起重要作用。有研究显示hMSH2减少增加了癌基因和(或)抑癌基因的突变率，从而引起肿瘤发生。hMSH2是否通过增加PTEN的突变而引起肿瘤，hMSH2和PTEN之间有无相关性，有待于进一步研究。 本实验检测胃癌组织中hMSH2与PTEN的蛋白表达情况，结合对照近端癌旁组织(距癌组织3cm)、远端癌旁组织(距癌组织>10cm)及正常胃组织(为外伤、息肉、溃疡病需手术切除的非胃癌组织以后称正常组织)中二者的表达情况，探讨hMSH2与PTEN在胃癌组织中的蛋白表达与临床病理特征之间的关系，指导及寻求胃癌临床诊断、评估其恶性程度及转移潜能、预测其预后可能的有效方法。方法： 1.采用SP免疫组化两步法对42例胃癌组织及其相应的近端癌旁组织、远端癌旁组织及15例正常胃组织，进行hMSH2与PTEN蛋白表达的检测；采用Western Blot半定量检测42例胃癌组织及相应远端癌旁组织hMSH2与PTEN蛋白表达。 2.采用SAS6.12统计软件进行统计学数据处理，计数资料用x2检验，P<0.05为差异有显著性意义。应用非参数统计中Spearman等级相关对二者在胃癌组织中的表达相互间关系进行分析。 结果： 1.用免疫组织化学法检测hMSH2与PTEN蛋白表达特征： 1.1hMSH2和PTEN蛋白在胃癌组织及近端癌旁组织、远端癌旁组织和正常胃组织中的表达： 胃癌组织中hMSH2、PTEN蛋白主要表达于细胞浆及细胞核。hMSH2蛋白表达缺失率在胃癌组织为54.76％(23/42)，在近端癌旁组织为19.05％(8/42)，在远端癌旁组织为14.29％(6/42)，在正常胃组织为0.00％(0/15)。胃癌组织中hMSH2蛋白表达缺失率明显高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组织(P<0.05)；而近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组织之间hMSH2蛋白表达无显著差异(P>0.05)。 PTEN蛋白表达缺失率在胃癌组织为61.90％(26/42)，在近端癌旁组织为23.81％(10/42)，在远端癌旁组织为16.67％(7/42)，在正常胃组织为20.00％(3/15)。胃癌组织中PTEN蛋白表达缺失率明显高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组(P<0.05)；而近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组织之间PTEN蛋白表达缺失率无显著差异（P>0.05)； 1.2胃癌组织中hMSH2和PTEN蛋白表达特征与临床病理类型关系hMSH2表达缺失率与患者的年龄、性别、肿瘤发生的部位、肿瘤分化程度、浆膜侵犯、TNM分期、淋巴结转移均无明显关系(P>0.05)。 PTEN蛋白表达缺失率与患者年龄、性别、肿瘤发生部位未见明显相关(P>0.05)、与肿瘤分化程度负相关(rs=-0.707317P<0.05)，与TNM分期、侵润深度、淋巴结转移呈正相关(rs=0.748157、rs=0.97958、rs=0.850255、rs=0.877482P<0.05)分化程度越高，PTEN表达缺失率越低，侵犯浆膜、TNM分期的Ⅲ+IV期、有淋巴结转移，PTEN表达缺失率越高。 2.Western Blot检测结果β-actin、hMSH2、PTEN蛋白分子量为42KD、110KD、55kD，Western杂交后分别在42KD、110KD、55kD位置出现相应阳性条带。采用凝胶成像分析系统对杂交条带进行半定量分析，蛋白含量以积分光密度值(IOD)表示。每次检测蛋白时均检测β-actin蛋白，以其为标准对所检测hMSH2、PTEN蛋白进行定量。与远端对照组织相比，42例胃癌组织中hMSH2蛋白有21例出现低表达，其低表达率为50.00％，PTEN有17例出现低表达，其低表达率为40.48％。 3.hMSH2与PTEN蛋白表达的相关性hMSH2与PTEN蛋白表达在胃癌中呈正相关(免疫组化检测中rs=0.938012，蛋白印记检测中rs=0.870675P<0.05)。在胃癌组织中错配修复基因hMSH2蛋白表达缺失常伴有PTEN白表达下调。 结论： (1)免疫组化和western blot检测结果一致，hMSH2与PTEN在胃癌的组织中表达缺失率升高，二者在胃癌组织中表达缺失率均高于近端癌旁组织、远端癌旁组织及正常胃组织。(2)在胃癌组织中hMSH2表达与其临床病理特征未见相关；(3)PTEN表达与其临床病理特征相关：肿瘤分化程度高的胃癌组织中PTEN蛋白表达缺失率低；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、有浆膜侵犯的胃癌组织中，PTEN蛋白表达缺失率高。(4)在胃癌发生、发展过程中hMSH2蛋白表达下调常伴有PTEN蛋白表达缺失。hMSH2与PTEN蛋白联合检测对胃癌的肿瘤恶性程度、转移潜能及预后的评估有着重要的意义。可作为判断胃癌转移、预后和制定治疗方案的一个联合型分子生物学的观测指标，对于此类高表达的病人，我们可以给予更为积极有针对性的综合治疗。

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讨论

结论

参考文献

综述：胃癌相关基因研究进展

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