聚乙二醇化重组人生长激素的制备、纯化、理化性质以及生物活性研究

摘要

目的：研究单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD，20KD)修饰重组人生长激素(rhGH)的最适反应条件以及修饰产物的纯化方法；并以目标产物——单聚PEG-rhGH为研究对象，对其相对分子量、纯度、等电点、修饰位点、二级结构、分子构象、体外受体亲和力以及体内生物学活性进行了研究。方法：用SDS-PAGE分析不同反应条件对修饰反应产物的影响；用离子交换及分子筛进行分离纯化；通过分子筛高效液相(SizeExclusionHPLC)、毛细管等电聚焦(CIEF)、圆二色谱(CD)、质谱、以及荧光光谱等方法对单聚PEG-rhGH的纯度、等电点、二级结构、相对分子量、修饰位点以及分子构象进行了研究；采用妊娠兔肝细胞膜放射受体分析法(RRA)检测单聚PEG-rhGH的体外受体亲和力；利用未成年去垂体大鼠体重增加法检测单聚PEG-rhGH的体内生物活性。结论：确立了单甲氧基聚乙二醇丙醛修饰重组人生长激素的最适反应条件以及修饰产物的纯化方法。并对单聚PEG-rhGH的相对分子量、纯度、等电点、修饰位点、二级结构以及分子构象进行了研究，同时检测了单聚PEG-rhGH的体外受体亲和力及体内生物活性，为研究和开发长效重组人生长激素提供了理论依据。

目录

文摘

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第一章引言

1.蛋白质聚乙二醇化的原理和方法

2.聚乙二醇化学

3.聚乙二醇化蛋白的生物学特性

4.聚乙二醇化的生物优化

5.蛋白质聚乙二醇化的研究进展

6.本课题研究的目的与意义

第二章实验材料与方法

1.实验材料

1.1主要仪器

1.2试验材料

2.实验方法

2.1聚乙二醇化重组人生长激素的制备

2.2聚乙二醇化重组人生长激素的纯化

2.3聚乙二醇化重组人生长激素的理化性质测定

2.4聚乙二醇化重组人生长激素生物活性测定

第三章实验结果

1.聚乙二醇化重组人生长激素的制备

2.聚乙二醇化重组人生长激素的纯化

3.聚乙二醇化重组人生长激素的理化性质

4.聚乙二醇化重组人生长激素的生物活性测定

第四章讨论

第五章总结

参考文献

致谢

作者简介