内吗啡肽体内抗氧化活性及其体外氧化代谢产物的研究

摘要

内吗啡肽(EMs)，mu阿片受体内源性的激动剂，主要生理活性表现为镇痛活性。之前我们组已经发现EMs可以与体外的活性氧自由基(ROS)作用，起到自由基清除剂的作用，本研究主要对EMs体内抗氧化活性以及其体外氧化代谢产物的性质进行了研究。 1)重金属诱导机体损伤通常被用来构建体内氧化损伤的模型。在此研究中，我们利用氯化镉(CdCl2)损伤雄性小鼠肝脏来建立肝脏氧化损伤模型，通过内吗啡肽1(EMI)对这一损伤作用的保护效果来研究EMI体内抗氧化活性。据报道，由金属镉(Cd)诱导的肝脏损伤的形成是氧化压力所介导的，因此，作为氧化损伤的主要指标，脂质过氧化反应的产物(LPO)和蛋白羧基化的产物(PCO)分别被检测，另外，同时还检测体内抗氧化体系状态的指标：超氧阴离子歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)以及还原型谷胱甘肽(GSH)。还对组织损伤的直观指标比如说肝脏组织学切片进行了分析。此外，肝脏内C泖Zn的含量也进行了分析和测定。从这些指标的分析结果可以得出：1)Cd的毒性作用能够加强体内LPO和PCO的程度，而EM1的体内保护作用能够有效减少LPO和PCO的增加。2)在Cd的毒性作用下，体内CAT，SOD的活性以及GSH的含量都会有所增加，这可能主要是由于机体的氧化应激反应所引起的，而EM1的体内保护作用能够缓解这一增强的氧化应激反应。而且内吗啡肽的保护作用并不与浓度成剂量依赖的关系，而是呈现U型曲线。我们的结果从几个方面对EM1的可能的作用机制提出了假设，包括其结构的特点以及EM1的金属螯合能力，可能为EM1实现其体内抗氧化活性起到了主要的作用，另外，阿片受体的激活，从而引起下游通道的改变和EM1对炎症因子的抑制作用可能在EM1对Cd诱导的肝脏损伤的保护过程中起到一定的作用。 2)据报道，Cd所诱导的心脏损伤是氧化压力所介导的。因此，通过氯化镉损伤雄性大鼠心脏来建立心脏氧化损伤的模型，通过EM1和内吗啡肽2(EE2)对这一损伤作用的保护效果来研究其体内抗氧化的能力。我们检测了其氧化损伤的指标：IIPO和PCO，同时，还对其抗氧化防御体系的指标(CAT，SOD和GSH)进行了研究。另外对其组织形态学切片进行了分析，从以上数据的分析可以得出：EM1和EM2具有体内抗氧化的能力，能够保护机体免受金属Cd所诱导的氧化损伤。另外，Cd所造成心脏损伤的一个标志就是对机体的血压造成一定的影响，主要是通过抑制内皮细胞一氧化氮(NO)的释放而实现的。我们通过研究在体麻醉大鼠的血压和心率，以及相对应的NO的含量，来研究Cd对血压的影响与NO浓度变化之间的关系，以及EM1和EM2对血压和N0的影响，结果证明EM1和EM2能够减低血压，并增加NO的含量。对于其具体的作用机制，还在研究之中。 3)作为体外的自由基清除剂和体内抗氧化剂，EM1被ROS的修饰过程以及其氧化代谢产物的性质吸引了我们的注意力。因此设计了体外的氧化模型模拟EM1与ROS作用的过程，并通过反向高效液相色谱分析(RP-HPLC)，光谱检测(UV-VIS)，电子顺磁光谱测定(ESR)、氨基酸分析，以及Schmorl反应等由此获得的氧化代谢产物进行了分析和鉴定，从而判断EM1在ROS作用下发生氧化反应而得到的产物是一种黑素类似的混合物，并对之命名为EM1-黑素。通过溶解度实验，放射性配体结合实验，NADH氧化实验，超氧阴离子清除实验对EM1-黑素的物理化学性质进行了研究，并与之前已知的多巴黑素与阿片黑素进行了比对和分析，认为EM1黑素是一种与这两种都类似但又不完全一样的黑素，可能是由于EM1中的Trp作为了另外一个自由基攻击的位点而使得黑素的聚合程度不同所导致的。另外还对其EM1-黑素可能的形成路径提出了假设。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章综述

第一节机体氧化应激的研究进展

第二节镉(Cd)的研究现状

第三节内吗啡肽研究现状

第四节阿片肽体外氧化代谢产物研究现状

参考文献

第二章立题依据及研究目的

一、EMs的体内抗氧化活性的研究

二.EMs的体外氧化代谢产物的研究

Part Ⅰ 内吗啡肽体内抗氧化活性的研究 第三章EM1对体内氧化损伤的保护的研究

第一节EM1对Cd诱导的肝脏损伤的保护作用的研究

第二节EMs对于Cd诱导的心脏损伤的保护作用

Part Ⅱ 内吗啡肽体外氧化代谢产物的研究 第四章EM1及其片段体外氧化代谢产物的研究

在学期间发表论文情况

致谢

附录：缩略词索引