环状RNAs在儿童急性B淋巴细胞白血病中的诊断和预后价值研究

摘要

目的：随着分子诊断技术的发展，分子标志物在儿童急性B淋巴细胞白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL）的诊断和预后中发挥重要作用，但仍有20-30%的B-ALL缺乏明确的疾病分子分型。本研究旨在探索新兴RNAs分子环状RNAs （ circular RNAs ， circRNAs）在儿童B-ALL中的诊断和预后价值。　　方法：通过查阅文献，筛选出目标circRNAs（hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708）。提取B淋巴母细胞系HMy2.CIR总 RNA ，反转录合成 cDNA。以 cDNA 为模板，分别扩增包含hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708反向剪切位点的特征片段，利用T-A克隆法构建重组质粒。梯度稀释重组质粒为标准品，应用SYBR荧光染料法建立实时定量PCR（real-time PCR）标准曲线，建立检测circRNAs的绝对定量PCR方法，并进行方法学评价。应用该法检测193例 B-ALL患儿和20 例非血液肿瘤对照中circRNAs （ hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708 ）的表达，探索circRNAs在儿童B-ALL中的诊断和预后价值。　　结果：成功建立检测circRNAs荧光定量PCR方法，该法线性范围广，灵敏度、特异性高，重复性好。应用该法对hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708及其分别对应的亲本基因表达进行定量。与对照组相比，hsa_circ_0004123（p=0.0057）、hsa_circ_0001857 （p＜0.0001）及其亲本基因ETV6（p=0.038）、PAX5（p＜0.0001）在儿童B-ALL中均呈高表达，差异具有统计学意义；hsa_circ_0001708 （p=0.1796）及其亲本基因IKZF1（p=0.7294）在儿童B-ALL中表达均有升高趋势，但无统计学意义。利用受试者工作曲线（ receiver operating characteristic curve, ROC 曲线）分析 hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708对儿童B-ALL中的诊断价值，发现曲线下面积（area under curve, AUC）分别为0.6937，0.8544，0.5968。提示hsa_circ_0001857对儿童B-ALL诊断价值较高，hsa_circ_0004123对儿童B-ALL诊断价值中等，而hsa_circ_0001708对儿童B-ALL中的诊断价值较弱。　　以 B-ALL 中 circRNAs 的中位拷贝数作为节点，分析hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708及其亲本基因ETV6、PAX5、IKZF1高表达和低表达儿童B-ALL的生存曲线，结果显示，高表达和低表达3种circRNAs及其亲本基因的生存曲线分析均无统计学意义。相关性分析发现，hsa_circ_0004123、hsa_circ_0001857、hsa_circ_0001708与其各自的亲本基因ETV6、PAX5、IKZF1表达，均呈正相关（R2值分别为0.6357、0.7635、0.8381）。　　结论：成功建立检测circRNAs荧光定量PCR法，线性范围广、灵敏度高、特异性好、重复性好，可用于检测患者标本中相应circRNAs的绝对拷贝数。其中 hsa_circ_0004123 和 hsa_circ_0001857 对儿童B-ALL具有良好的诊断价值，可用于疾病诊断。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 检测环状RNAs绝对荧光定量PCR方法的建立和方法学评价

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 重组质粒的构建和鉴定

2.2 建立标准曲线

2.3 方法学评价

3 讨论

第二部分 应用绝对荧光定量PCR方法检测B-ALL患儿骨髓中的环状RNAs

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3统计学处理

2 结果

2.1 病人临床特点分析

2.2 与非血液肿瘤对照相比，3种circRNAs在B-ALL中的表达上调

2.3 circRNAs对儿童B-ALL的诊断价值

2.4 circRNAs表达与临床特点和实验室检查的相关性分析

2.5 circRNAs在儿童B-ALL中的预后价值

2.6 circRNAs的表达和线性基因表达的相关性分析

3 讨 论

全文总结

参考文献

文献综述:环状RNAs在白血病诊治中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文及参加的重要学术会议