儿童急性淋巴细胞白血病microRNA与糖皮质激素受体表达的相关性研究

摘要

目的：急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童发病率最高的恶性肿瘤性疾病,现代主要通过联合化疗使儿童ALL的存活率大为改观,但仍有部分患儿因耐药而复发,现时已公认糖皮质激素(GC)治疗是否敏感是判定小儿ALL预后的一项强烈和具独立意义的指标.ALL GC耐药的分子调控机制至今仍未完全清楚,对GC耐药机制的深入研究将有助于为今后更精确的评估预后、逆转GC耐药和改善治愈率提供全新和可行的路径.方法：收集共40份儿童ALL骨髓样本,其中包括31份ALL GC敏感患儿骨髓样本和9例GC不敏感骨髓样本.通过生物信息学方法预测出可能与NR3C1存在靶对关系的microRNA:miR-142-3p、miR-124、miR-181a、miR-708、miR-18a,首先选定可能性较大的有靶对关系的miR-124作为研究对象,然后用双荧光报告基因测试、MTT、流式检测凋亡等细胞实验方法验证miR-124与NR3C1(功能性GC受体)的靶对关系,并采用qRT-PCR、Western blot等方法进一步在ALL患儿骨髓样本中检测miR-124的表达及NR3C1蛋白的表达情况,分析GC耐药的分子机制.结果：NR3C1蛋白在ALL GC敏感细胞株和GC敏感患者骨髓样本中均呈高表达,而在GC耐药细胞株和GC不敏感骨髓样本中呈低表达(p＜0.05);miR-124在GC耐药细胞株中的表达明显高于敏感细胞株(p＜0.01),通过转染使miR-124过表达能抑制NR3C1的表达水平,而下调miR-124表达使NR3C1的表达水平上升;ALL细胞株在氟美松的作用下,过表达miR-124使细胞存活率增加和凋亡率减少,而抑制miR-124出现相反的结果.体内外研究结果显示miR-124靶向调控NR3C1,通过转录后抑制作用,抑制NR3C1蛋白的合成,促进ALL细胞对GC耐药.结论：miR-124靶向调控NR3C1并抑制其表达是导致ALL GC耐药的重要机制之一,miR-124的表达水平有可能今后被用于GC治疗反应和预后的评估,将miR-124作为药靶逆转GC耐药是治疗GC耐药ALL和改善预后的一条潜在的全新途径.