STAT3信号通路在膀胱肿瘤发生发展中的作用

摘要

目的：研究不同膀胱粘膜组织中STAT3蛋白的表达情况，探讨STAT3的表达与膀胱粘膜上皮细胞癌变的关系；进一步研究STAT3信号转导通路在膀胱癌细胞增殖凋亡和侵袭转移调控中的作用；评价STAT3信号通路在膀胱肿瘤发生发展中的作用。 方法：(1)应用免疫组织化学染色方法检测66例膀胱移行细胞癌、22例膀胱乳头状瘤、100例膀胱粘膜鳞状上皮化生、40例腺性膀胱炎和20例正常膀胱粘膜组织标本中STAT3蛋白表达情况并进行统计学分析。(2)分别应用药物AG490和基因治疗decoy法阻断膀胱癌细胞中的STAT3信号通路，台盼蓝排斥试验检测细胞活力，噻唑蓝比色试验检测细胞增殖，克隆形成试验检测膀胱癌干细胞对药物的敏感性，Hoechst33258/PI荧光双染检测细胞凋亡特征，流式细胞仪检测细胞周期和早期凋亡，Westernblot检测STAT3通路各成员蛋白表达水平，凝胶阻滞电泳检测STAT3的DNA结合活性，RT-PCR检测STAT3下游靶基因CyclinDl和Bcl-xL的mRNA表达水平。(3)应用免疫组织化学染色方法检测66例膀胱移行细胞癌、22例作为对照的膀胱乳头状瘤组织标本中STAT3磷酸化蛋白(p-STAT3)和VEGF的表达，同时分析在p-STAT3和VEGF不同表达状态下，膀胱癌组织微血管密度(MVD)的变化，并进行统计学分析。分别应用药物AG490和基因治疗decoy法阻断膀胱癌细胞中的STAT3信号通路，以体外肿瘤细胞侵袭模型检测膀胱癌细胞侵袭能力，以膀胱癌体内侵袭模型观察移植瘤生长情况，并行肿瘤微血管密度(MVD)免疫组织化学检测，Westernblot检测p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平，凝胶阻滞电泳检测STAT3的DNA结合活性，RT-PCR检测MMP-2、TIMP-2及VEGFmRNA的表达。 结论：(1)STAT3的表达与膀胱粘膜组织的病理类型和分化等级相关，STAT3高表达可能是膀胱粘膜上皮细胞癌变的早期变化，与细胞的恶性转化有关。(2)STAT3信号转导通路在膀胱癌的增殖凋亡调控中发挥重要作用，通过调节下游靶基因的表达参与调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡。应用信号传导阻滞剂AG490和基因治疗decoy法可特异性阻断STAT3信号转导通路，抑制膀胱癌细胞的增殖，促进其凋亡。(3)STAT3信号转导通路在膀胱癌的侵袭转移调控中发挥重要作用，通过调节下游靶基因的表达参与调控膀胱癌细胞的侵袭转移。STAT3磷酸化蛋白高表达与膀胱癌浸润有关，STAT3信号通路在膀胱癌中过度激活后，异常高表达的磷酸化STAT3蛋白可能通过增加VEGF的表达来促进肿瘤血管的生成，导致膀胱肿瘤恶性进展。应用信号传导阻滞剂AG490和基因治疗decoy法可特异性阻断STAT3信号转导通路，抑制膀胱癌细胞的侵袭和转移。(4)异常激活的STAT3信号通路可能是膀胱肿瘤发生发展的关键调控途径，靶向阻断STAT3信号通路的药物AG490和基因治疗decoy法为膀胱癌的治疗提供新的有效方法和策略。

目录

前言

第一部分 STAT3蛋白在不同膀胱粘膜组织中的表达及其意义

第二部分 STAT3信号通路在膀胱癌细胞增殖凋亡调控中的作用 实验1 药物AG490阻断STAT3通路对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

第二部分 STAT3信号通路在膀胱癌细胞增殖凋亡调控中的作用 实验2 基因治疗decoy法靶向阻断STAT3通路对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

第三部分 STAT3信号通路在膀胱癌细胞侵袭转移调控中的作用 实验1 STAT3异常磷酸化对膀胱癌血管生成的影响

第三部分 STAT3信号通路在膀胱癌细胞侵袭转移调控中的作用 实验2 药物AG490阻断STAT3通路对膀胱癌细胞侵袭和转移的影响及其作用机制

第三部分 STAT3信号通路在膀胱癌细胞侵袭转移调控中的作用 实验3 基因治疗decoy法靶向阻断STAT3通路对膀胱癌细胞侵袭和转移的影响及其作用机制

附图

综述 STAT3与肿瘤的相关性研究进展

附录

致谢