声明
1 绪论
1.1 心脏的结构与生理功能
1.1.1 心脏的结构
1.1.2 心脏的生理功能
1.2 心律失常发生发展病理生理机制
1.2.1 心脏动作电位的形成
1.2.2 心律失常的发生机制
1.3 离子通道与遗传性心律失常
1.3.1 Brugada Syndrome
1.3.2 长QT综合征
1.3.3 短QT综合征
1.3.4 儿茶酚胺敏感性室性心动过速
1.4 电压门控心脏钠离子通道Nav1.5简述
1.4.1 Nav1.5分子结构和功能
1.4.2 Nav1.5辅助亚基和其他相互作用蛋白
1.4.3 Nav1.5与遗传性心律失常疾病的关系
1.5 SAR1基因简介
1.6MOG1基因简介
1.7本课题研究意义以及主要内容
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞
2.1.2 实验所需主要仪器和设备
2.1.3 主要试剂，溶液及试剂盒
2.2 实验方法
2.2.1 DH5α细菌感受态细胞的制备
2.2.2 PCR扩增产物纯化
2.2.3 质粒或酶连产物的转化
2.2.4 利用Omega Endo Free Plasmid Mini Kit Ⅱ抽提质粒
2.2.5 过表达质粒的构建
2.2.6 细胞培养技术
2.2.7 siRNA干扰技术及RNA的提取
2.2.8 反转录反应
2.2.9 荧光定量实时PCR
2.2.10 膜片钳技术
2.2.11 细胞免疫沉淀技术
2.2.12 GST Pull-Down实验
2.2.13 大鼠乳鼠心肌细胞的分离
2.2.14 利用生物素提取细胞膜表面蛋白
2.2.15 相互作用结构模型的建立
2.2.16 统计分析方法
3 实验结果
3.1 SAR1A和SAR1B调控Nav1.5在细胞表面的表达水平
3.1.1 SAR1A负显性突变引起Nav1.5在细胞表面的表达水平降低
3.1.2 SAR1B负显性突变引起Nav1.5在细胞表面的表达水平降低
3.2 SAR1A和SAR1B突变对心脏钠离子通道INa的影响研究
3.2.1 SAR1A负显性突变显著减小HEK293/Nav1.5细胞心脏钠离子通道INa电流密度
3.2.2 SAR1B负显性突变显著减小HEK293/Nav1.5细胞中心脏钠离子通道INa电流密度
3.2.3 SAR1A和SAR1B负显性突变显著减小乳鼠心肌细胞中心脏钠离子通道INa电流密度
3.3 内源性SAR1A和SAR1B对INa电流密度的影响研究
3.3.1 敲低 SAR1A对INa电流密度有轻微的影响
3.3.2 敲低SAR1B对INa电流密度没有影响
3.3.3 同时敲低SAR1A和SAR1B的表达能显著降低INa电流密度
3.4 SAR1与MOG1相互作用研究
3.4.1 用ZDOCK预测SAR1和MOG1存在相互作用
3.4.2 GST Pull-down显示MOG1和SAR1在体外存在相互作用
3.4.3 免疫共沉淀技术显示MOG1和SAR1在体内存在相互作用
3.5 SAR1A和SAR1B在MOG1增大INa过程中的功能研究
3.6 SAR1A和SAR1B在MOG1促进Nav1.5上膜转运过程中的功能研究
4 讨论
5 总结与展望
致谢
参考文献
附录1 攻读博士期间发表的学术论文
附录2 本文所用到的主要英文缩略语
