UAE对豚鼠子宫肌瘤模型的子宫内膜病理及容受性影响的实验研究

摘要

子宫动脉栓塞术(UAE)用于治疗子宫肌瘤已多年。随着UAE治疗子宫肌瘤的广泛开展，临床上对UAE是否会影响患者后续生育能力的问题日益重视，但目前对此问题尚无明确和统一意见。子宫内膜容受性的状态与生育功能及妊娠成功率密切相关，这一概念已被临床普遍接受。近年来，随着对子宫内膜容受性的各种相关评价指标的深入研究，多种指标已体现出其临床实用价值。本研究拟建立合适的子宫肌瘤动物模型，对肌瘤模型行UAE后观察与内膜容受性相关的某些公认评价指标(如微血管密度、雌孕激素受体及整合素等)的数量或含量的变化及其过程，从动物实验角度判断UAE对子宫内膜容受性的影响，为探讨UAE治疗子宫肌瘤后对生育功能产生何种影响这一问题提供初步实验证据。本文分为三个部分：
　　 第一部分：应用三丙烯微球对豚鼠子宫肌瘤模型行子宫动脉栓塞术的实验研究。
　　 目的：⑴应用雌孕激素联合法建立豚鼠子宫肌瘤模型。⑵探讨应用三丙烯微球(Embosphere)对豚鼠子宫肌瘤模型行子宫动脉栓塞术的可行性。
　　 方法：㈠实验动物分组：40只雌性豚鼠随机分为三组。(1)盆腔动脉铸型组：10只，用于行盆腔动脉血管铸型术，了解雌性豚鼠子宫动脉及其他盆腔动脉的解剖学特征，为下一步行子宫动脉栓塞术提供相应的基础解剖实验数据；(2)子宫肌瘤模型空白组(模型组)：15只，应用雌孕激素联合法建立豚鼠子宫肌瘤模型，不施行UAE术，直接取标本研究肌瘤成模情况及病理改变；(3)子宫肌瘤模型子宫动脉栓塞组(UAE组)：15只，应用雌孕激素联合法建立子宫肌瘤模型，成模后行双侧子宫动脉栓塞的技术研究及栓塞后病理分析。㈡主要观察指标：(1)正常豚鼠子宫动脉和髂内动脉起始、走行及分支分布情况；髂内动脉、子宫动脉主干及其分支的长度和直径。(2)UAE术中栓塞微球的用法及用量。(3)UAE组及模型组子宫标本的肌瘤结节的大体病理形态，计算成瘤率。(4)光学显微镜下观察模型组肌瘤结节的病理形态，UAE组栓塞微球在血管内分布情况、肌瘤结节及子宫肌层栓塞后的病理改变。
　　 结果：双侧子宫动脉主干由髂内动脉发出，主干和弓状支的血管直径分别为0.35±0.022 mm及0.16±0.012 mm。UAE组15只豚鼠成功行双侧子宫动脉栓塞术。术中40-120μm及100-300μm Embosphere的用量分别为0.040±0.005mL和0.017±0.002mL。UAE组及模型组子宫肌瘤成模率合计达75％以上。模型组子宫肌瘤结节处肌瘤细胞呈栅栏状或编织状排列。UAE组标本病理切片可见子宫动脉弓状支、浆膜下二级分支及部分三级分支动脉内均有栓塞微球存在。栓塞后肌瘤局部出现缺血坏死，子宫肌层无明显缺血坏死病理改变。
　　 结论：①雌孕激素联合负荷法可诱导豚鼠子宫肌瘤模型建立，该方法成模率较高，所建肌瘤模型具有实验实用价值。②应用三丙烯微球行豚鼠子宫肌瘤模型UAE具有可行性，栓塞效果良好，其实验操作技术可进一步应用于豚鼠子宫肌瘤模型UAE的相关基础研究。
　　 第二部分：子宫肌瘤动物模型UAE后子宫内膜病理改变及UAE对内膜MVD影响的实验研究。
　　 目的：探讨子宫肌瘤动物模型UAE后子宫内膜的病理改变及微血管密度的变化过程。
　　 方法：⑴洁级实验用雌性豚鼠70只，鼠龄约6个月，体重(420.8±28.5)g。应用雌孕激素联合负荷法建立豚鼠子宫肌瘤模型。具体方案同第一部分。⑵以Ⅷ因子为分子标记物，用石蜡切片免疫组化法测定各组动物标本子宫内膜基底层的微血管密度(MVD)值。⑶各组标本切片常规HE染色，显微镜下观察内膜区的病理组织形态，判断内膜有无缺血损伤并根据其损伤的病理学形态的严重程度进行病理分级。每个动物标本取两张切片，每张切片随机观察3个包含内膜结构的视野并进行病理分析。
　　 结果：①各组子宫标本的内膜病理形态分析：对照组及假手术组内膜腺体结构完整，腺上皮无明显坏死脱落，仅在少数视野见腺腔内有少量脱落上皮细胞，间质细胞无水肿、坏死。②各组标本内膜基底层MVD值(条/视野)：对照组(17.27±4.62)，A1组(9.35±2.56)，A2组(14.26±4.13)，A3组(16.89±4.25)，假手术组(17.84±4.55)。
　　 结论：⑴UAE后一段时期内，子宫内膜基底层MVD数量有所下降，MVD的减少有可能导致内膜微循环灌注不足及内膜微环境的改变，因而可能对内膜容受性造成一定程度的影响。⑵随着UAE后时间延长，内膜基底层MVD数量有逐步恢复的趋势，推测其原因是机体通过局部自身调节，促进内膜基底层新生微血管形成，重构新的血管网。MVD的恢复可减少血流灌注不足对内膜容受性的负面影响。⑶UAE后短期内，内膜整体可处于相对缺血缺氧状态，可出现一定程度的缺血性损伤病理改变，但这种损伤一般为局限性，程度以轻至中度居多。随着血供的恢复和内膜微环境的改善，至栓塞后一段时期，内膜的病理组织学形态可基本恢复至正常。
　　 第三部分：UAE对子宫肌瘤动物模型的子宫内膜雌激素受体及孕激素受体表达含量影响的实验研究。
　　 目的：探讨子宫肌瘤动物模型行UAE后对子宫内膜雌激素受体及孕激素受体含量的影响及其变化过程。
　　 方法：⑴所有动物获取标本时从腹主动脉取血3ml，用生化自动分析仪测定动物外周血雌、孕激素(E2、P)水平。⑵对各组子宫标本内膜腺体及问质ER、PR的含量(H-score分值)进行对比统计分析。实验组ER、PR的H-score分值与第二部分结果中该组的内膜MVD数值行相关分析。
　　 结果：①ER在各组标本子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有表达，表达的阳性部位为细胞核，阳性染色的比例及强弱程度在各组之间有所差异。②PR在各组标本子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有表达，表达的阳性部位亦为细胞核，与ER的表达相似，PR阳性染色的比例及强弱程度在各组之间也有所差异。③经Pearson直线相关分析，实验组内膜腺体及间质ER、PR含量的H-score分值与第二部分结果中的实验组内膜基底层MVD值均呈正相关关系。分别为ER与MVD：(r1=0.872，P1=0.006；r2=0.795，P2=0.015)；PR与MVD：(r1=0.817，P1=0.023；r2=0.763，P2=0.010)。
　　 结论：⑴UAE后一段时期内，内膜ER、PR的表达含量会有所下降。ER、PR的减少可能与栓塞后内膜血流灌注的变化、内膜微环境对细胞代谢合成功能的影响以及内膜对激素反应性降低等多种因素有关。⑵鉴于ER、PR与子宫内膜容受性的密切关系，UAE后ER、PR含量的下降有可能在一定程度上影响内膜的容受性，从而降低正常怀孕的几率。同时，内膜ER、PR的降低并非持续性和不可逆性，随着时间延长，ER、PR的含量将有所恢复，且在一定时期内其恢复的程度与UAE后内膜MVD的重新增加存在一定的统计学相关性。⑶内膜ER、PR含量随时间的恢复从理论上而言，可将UAE对内膜容受性的负面影响逐步减低，但此过程会否对UAE后的生育功能产生实质性影响及其远期变化如何，还有待进一步研究。
　　 第四部分：UAE对子宫肌瘤动物模型的子宫内膜整合素ανβ3表达含量影响的实验研究。
　　 目的：探讨子宫肌瘤动物模型UAE后子宫内膜整合素ανβ3含量的变化过程及其相关影响因素。
　　 方法：⑴石蜡切片免疫组化二步法测定各组动物子宫内膜中整合素ανβ3的表达含量。显微镜下观察免疫组化染色切片，寻找阳性显色区域。⑵石蜡切片免疫组化法测定各组动物子宫内膜基底层的MVD数量。MVD检测所需的试剂、操作过程和步骤及计算方法同第二部分。⑶对各组子宫标本内膜腺体的整合素ανβ3的表达含量进行对比统计分析。实验组的MOD值与该组的MVD数值行相关分析。
　　 结果：①整合素ανβ3在各组标本子宫内膜腺体上皮细胞及腔上皮细胞中均有表达，以腺上皮细胞表达更明显。表达的阳性部位为细胞浆，阳性颗粒在部分细胞基底部近胞膜处呈线样沉积。②各组标本内膜腺体整合素ανβ3含量的平均光密度(MOD)值如下。实验组B1组与B2组之间MOD值比较有显著性统计学差异(P=0.005)。③各组标本内膜基底层的微血管密度(MVD，单位：条/视野)值如下：对照组(18.43±4.85)；实验组B1组(14.32±3.74)；实验组B2组(17.51±4.45)。④经Pearson直线相关分析，实验组内膜腺体整合素ανβ3的MOD值与内膜MVD值呈正相关关系：r=0.783，P=0.005。
　　 结论：⑴在UAE后一段时期内，内膜整合素ανβ3的表达含量会有所下降。ανβ3含量的减少除了可能与栓塞后内膜微循环血流灌注的下降、内膜微环境的改变等因素有关外，内膜PR含量的减少导致孕激素对ανβ3调控作用的减弱也可能是另一重要原因。⑵UAE后内膜整合素ανβ3含量的降低并非持续性和不可逆性，随着栓塞后时间延长，内膜ανβ3含量有逐渐恢复趋势；本实验结果提示ανβ3的恢复进程较ER、PR恢复的进度略为滞后。至本研究的观察终点，实验组内膜ανβ3的测定含量仍未达到对照组水平。⑶UAE后内膜黄体中期整合素ανβ3含量有不同程度下降，推测在一定时期内会对子宫内膜容受性造成相对的负面影响，或引起子宫内膜容受性某种程度缺陷，从而可能降低妊娠成功率，但其长远的实质性影响，仍有待进一步探讨。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词中英文对照

声明

前 言

第一部分 应用三丙烯微球对豚鼠子宫肌瘤模型行子宫动脉栓塞术的实验研究

目 的

材料和方法

结 果

讨 论

本章小结

第二部分 子宫肌瘤动物模型UAE后子宫内膜病理改变及UAE对内膜MVD影响的实验研究

目 的

材料和方法

结 果

讨 论

本章小结

第三部分 UAE对子宫肌瘤动物模型的子宫内膜雌激素受体及孕激素受体表达含量影响的实验研究

目 的

材料和方法

结 果

讨 论

本章小结

第四部分 UAE对子宫肌瘤动物模型的子宫内膜整合素ανβ3表达含量影响的实验研究

目 的

材料和方法

结 果

讨 论

本章小结

全篇结束语

参考文献

附 图

附 录

致 谢