声明
致谢
摘要
第一章绪论
1．1谷氨酰胺转氨酶的概述
1．1．1谷氨酰胺转氨酶的来源与分类
1．1．2 MTG催化作用机理
1．1．3 MTG的结构
1．2 MTG的修饰功能
1．2．1溶解度
1．2．2凝胶性
1．2．3持水力
1．2．4粘弹性
1．3 MTG在食品工业中的应用
1．3．1肉制品
1．3．2乳制品
1．3．3谷物产品
1．3．4豆制品
1．4 MTG的生产研究进展
1．4．1野生菌的发酵生产
1．4．2重组菌株的发酵生产
1．5枯草芽孢杆菌表达系统的概述
1．6乳酸乳球菌表达系统的概述
1．7课题研究目的意义及主要内容
1．7．1立题依据及意义
1．7．2主要研究内容
第二章茂源链霉菌来源的MTG在枯草芽孢杆菌中的分泌表达
2．1材料与方法
2．1．1菌株和质粒
2．1．2材料与试剂
2．1．3实验仪器
2．1．4培养基和主要溶液的配制
2．1．5本章所用引物及其特征
2．2实验方法
2．2．1感受态细胞的制备
2．2．2重组表达载体pMA5mtg的构建
2．2．3重组表达载体pHT43mtg的构建
2．2．4重组MTG-His表达菌株生长曲线的测定
2．2．7诱导剂浓度的优化
2．2．8蛋白质的纯化与活化
2．2．9 MTG-6His的酶活力测定
2．2．10大豆蛋白的交联反应
2．3数据处理
2．4结果与分析
2．4．1重组表达载体pMA5mtg的构建
2．4．2重组表达载体pHT43mtg的构建
2．4．3 SPwapA能够指导MTG-6His在B．subtilis中的分泌
2．4．4 SPamyQ能够指导MTG-6His在B．subtilis中的分泌
2．4．5 IPTG诱导剂浓度的优化
2．4．6 MTG-6His的表达对B．subtilis的生长无明显影响
2．4．7B．subtilis产生有功能活性的MTG
2．4．8成熟MTG-6His与大豆分离蛋白的交联反应
2．5本章小结
第三章茂源链霉菌来源的MTG在乳酸乳球菌中的分泌表达
3．1材料与方法
3．1．1菌株和质粒
3．1．2材料与试剂
3．1．3实验仪器
3．1．4培养基和主要溶液的配制
3．1．5本章所用引物及其特征
3．2实验方法
3．2．1感受态细胞的制备
3．2．2重组表达载体pNZ8048-SPusp45-promtg的构建
3．2．3重组表达载体pNZ8048-Pp5-SPusp45(K2A)-promtg的构建
3．2．6重组SPusp45-MTG-6His的诱导表达和纯化
3．2．7诱导剂浓度的优化
3．2．8蛋白质的纯化与活化
3．2．10大豆蛋白的交联反应
3．3数据处理
3．4结果与分析
3．4．1重组表达载体pNZ8048-SPusp45-promtg的构建
3．4．2重组表达载体pNZ8048-Pp5-SPusp45(K2A)-promtg的构建
3．4．3 SPusp45(K2A)能够指导pro-MTG-6His在L．lactis中的分泌
3．4．4 SPusp45能够指导pro-MTG-6His在L．lactis中的分泌
3．4．5 Nisin诱导剂浓度的优化
3．4．7 L．lactis产生有功能活性的MTG
3．4．8 pro-MTG-6His水解产生的MTG-6His可以适当的交联SPI
3．5本章小结
第四章MTG在乳酸乳球菌中的生产优化
4．1材料与方法
4．1．1菌株和质粒
4．1．2材料与试剂
4．1．3实验仪器
4．1．4培养基和主要溶液的配制
4．1．5本章所用引物及其特征
4．2．1感受态细胞的制备
4．2．2重组表达载体pNZ8048-SPusp45-promtg-mature-mtg的构建
4．2．5 pro-MTG-6His在L．lactis中的胞外表达
4．4．1重组表达载体pNZ8048-SPusp45-promtg-mature-mtg的构建
4．4．2 Mature MTG可以促进L．lactis的生长
4．4．3 Mature MTG在L．lactis中的胞内表达
4．4．5 MTG-6His的酶活力测定
4．5本章小结
第五章结论与展望
5．1结论
5．2本文创新点
5．3展望
参考文献
攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况
