海洋链霉菌来源的脂肪酶OUC-Sb-lip2的异源克隆表达及其富集DHA的应用

摘要

脂肪酶是α/β水解酶家族中重要的一类酶,可催化酯键的断裂和形成,具有从天然鱼油(藻油)中富集DHA的应用潜力.本研究以海洋链霉菌来源的脂肪酶OUC-Sb-lip2为研究对象,进行了酶的异源表达和脂肪酶酶学特性研究,同时研究了其在富集DHA方面的应用.结果表明, OUC-Sb-lip2最适碳链长度为C8;最适反应温度为40 ℃;最适pH为9.0(Tris-HCl);在45 ℃条件下保持96 h后仍有82%酶活;在偏碱性的缓冲液中仍保持78%的酶活;可知OUC-Sb-lip2是一个适应中性温度,具有耐碱性的脂肪酶.将OUC-Sb-lip2应用于水解甘油三酯型DHA以将DHA富集到甘油单酯上,通过优化反应得到条件:鱼油与缓冲液比例为1∶1(w/v),反应温度为30 ℃,加酶量1 600 U/g,反应24 h后,最终的水解率可达81.9%,DHA甘油单酯的生成量为8.62 mg/mL.