螺旋藻蛋白提取及其酶解产物对ACE抑制活性的研究

摘要

采用不同的蛋白提取方法获得螺旋藻蛋白并通过酶解的方法获得具有ACE抑制作用的水解产物，通过体外实验和体内实验对其抗血压升高作用进行评价。在蛋白提取中，对超声波法、高压均质法和反复冻融法的蛋白提取条件进行了优化，在三种方法各自的最佳提取条件下，螺旋藻蛋白的溶出率分别达到了71.51％、73.87％和72.03％。通过对蛋白溶出率进行比较，确定了以高压均质法为主要方法的提取手段。在蛋白分离过程中，确定了乙醇沉淀法和等电点沉淀法相结合的实验方法对螺旋藻蛋白进行分离。结果表明最佳分离条件为蛋白分离液pH值为4.4，乙醇浓度为70％，此条件下螺旋藻蛋白得率达到了55.14％，其中蛋白纯度为85.21％。水解过程是以胃蛋白酶、胰蛋白酶以及两种酶复合对螺旋藻蛋白进行水解，以ACE抑制率为评价指标对水解条件进行了优选。结果显示，胃蛋白酶水解的最佳条件为水解温度37℃，酶与底物比1:50，pH值为3.0，底物浓度为5％。胰蛋白酶水解的最佳条件为水解温度42℃，酶与底物比1:50，pH值为8.0，底物浓度为6％。胃蛋白酶、胰蛋白酶和复合酶水解产物的IC50值分别为0.104mg/mL、0.017mg/mL和0.087mg/mL。在体内评价过程中，以最佳水解条件下获得的胃蛋白酶水解产物、胰蛋白酶水解产物和复合酶水解产物为受试药品，以9周龄SHR大鼠为实验动物，以不同剂量(5g/kg、1g/kg、0.2g/kg)对SHR大鼠进行灌胃，在0-8h内监测其尾动脉血压的变化，判断各水解产物的抗血压升高作用。结果表明，胃蛋白酶水解产物、胰蛋白酶水解产物及胃蛋白酶和胰蛋白酶复合水解产物对SHR大鼠的血压升高具有明显的抑制作用，其中胰蛋白酶水解产物和复合酶水解产物的抗血压升高作用优于胃蛋白酶水解产物。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

1.1 课题的研究背景

1.2 国内外研究概况及进展

1.3 ACE抑制肽的作用机理

1.4 ACE抑制肽的活性检测方法

1.5 开展此课题的依据

1.6 开展此课题的意义

第二章材料和方法

2.1螺旋藻蛋白的提取

2.2螺旋藻蛋白的分离

2.3 ACE抑制活性的体外检测方法

2.4螺旋藻蛋白水解及水解产物对ACE抑制率的测定

2.5水解产物半数抑制浓度(IC50)的测定

2.6水解产物对原发性高血压大鼠血压影响的实验结果

第三章实验结果

3.1不同提取方法对螺旋藻蛋白提取的实验结果

3.2确定螺旋藻蛋白分离条件的实验结果

3.3不同蛋白酶水解螺旋藻蛋白的实验结果

3.4水解产物的半数抑制浓度测定结果

3.5水解产物对原发性高血压大鼠血压影响的实验结果

第四章分析与讨论

4.1螺旋藻蛋白提取方法比较

4.2螺旋藻蛋白分离效果分析

4.3水解产物ACE抑制活性体外检测效果

4.4水解产物对原发性高血压大鼠血压的影响

第五章结论

参考文献

致谢