PCR技术用于啤酒中有害乳酸菌的检测和鉴定的研究

摘要

本课题比较了目前广泛用于啤酒有害菌检测的选择性培养基对啤酒有害菌检出的效果和菌体在培养基上的生长速度，为啤酒污染乳酸菌选择合适的富集培养基。本文比较了短乳杆菌、林氏乳杆菌、布氏乳杆菌、植物乳杆菌和四联球菌在NBB、MRS和自制UBA培养基上的菌落生量。同时比较了几种DNA提取的方法的提取效果。根据乳酸菌16srDNA序列的特征，设计合成了针对啤酒有害乳酸菌的通用引物，同时根据乳酸菌16srDNA序列的高变区设计了5种乳酸菌的特征引物，PER技术验证结果表明该5种引物能够准确鉴定乳酸菌。 在以上研究的基础上，本文建立了PCR快速检测啤酒有害菌的新方法，用基于16srDNA部分序列的特征引物对啤酒污染乳酸菌进行PCR检测，灵敏度可达到15个细胞(CFU)/250mL，样品的预培养需12～18h。啤酒有害菌检测所需时间从传统的5d减少到24h。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

1引言

1.1啤酒酿造中污染微生物的种类和对啤酒的危害

1.2传统方法在微生物多样性研究中的应用

1.3分子生物学方法在微生物多样性研究中的应用

1.4啤酒中微生物的检测

1.5复杂样品中微生物总DNA的提取

1.6本论文的研究目的、意义和内容

2 啤酒有害菌富集培养基的选择

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3结论

3 啤酒中乳酸菌DNA提取方法的比较

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3结论

4 啤酒中污染乳酸菌通用引物和五种常见有害乳酸菌特征引物的设计

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3结论

5 引物的验证

5.1材料与方法

5.2结果与分析

5.3结论

6 引物LAB1/LAB2用于PCR检测啤酒中乳酸菌灵敏度的确定

6.1材料与方法

6.2结果与分析

6.3结论

7 结论与展望

7.1本文主要结论

7.2问题与展望

致 谢

参考文献

附录

作者简介